等溫核酸試劑盒

RPA的原理;

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動DNA合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進行指數(shù)式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非?？欤话憧稍谑昼娭畠?nèi)獲得可檢出水平的擴增產(chǎn)物。

核酸試劑盒

突如其來的新冠疫情，給2020年一個讓人都猝不及防的開端?；仡櫼咔楸l(fā)初期，病勢之兇險、形勢之嚴(yán)峻、前路之迷茫，都無跡可尋。為有效遏制疫情擴散，對重點人群的新冠核酸檢測成為防控疫情的重要手段，而隨著檢測量的不斷攀升，檢測試劑盒的需求也越來越大。新冠疫情發(fā)生以來，檢測成為控制疫情的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，因此，核酸檢測試劑也成為抗擊疫情急需的應(yīng)急物資之一。

RPA技術(shù)主要依賴于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，反應(yīng)溫度在37°C左右。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動DNA合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進行指數(shù)式擴增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。整個過程進行得非?？?/span>，一般可在十分鐘之內(nèi)獲得可檢出水平的擴增產(chǎn)物。RPA擴增的基礎(chǔ)體系(TwistAmp? Basic)含有DNA擴增所需的所有試劑，我們只要準(zhǔn)備好引物和模板就行。擴增結(jié)果可以通過凝膠電泳進行終點檢測，產(chǎn)物純化后可用于下游研究。

在這個基礎(chǔ)體系中添入不同的酶和探針，就可以實現(xiàn)多樣化的RPA應(yīng)用。舉例來說，TwistAmp? exo結(jié)合了exo探針技術(shù)和核酸外切酶III，能實現(xiàn)數(shù)據(jù)的實時讀取，就像熒光定量PCR一樣。不過反應(yīng)終點的擴增子總量有所減少，適合獲得強熒光信號進行動力學(xué)分析，不適合終點檢測(比如跑膠)。將exo探針技術(shù)、核酸外切酶III和逆轉(zhuǎn)錄酶結(jié)合起來，可以一步實現(xiàn)RNA模板的實時擴增。

近年來，等溫擴增方法的發(fā)展讓基因檢測得以擺脫熱循環(huán)儀器的使用，因此更加便捷化?；诘葴財U增方法，多種具有POCT潛力的SARS-CoV-2檢測技術(shù)得以開發(fā)出來。特別是結(jié)合CRISPR技術(shù)后，檢測的特異性和靈敏度得到了進一步提升。盡管如此，幾乎所有這些報道的技術(shù)僅僅證明了其在單基因檢測中的應(yīng)用。然而，臨床認(rèn)可的金標(biāo)準(zhǔn)方法，如RT-qPCR，通常需要檢測兩個基因。因為雙基因檢測能夠有效地避免因基因部分降解，基因拷貝數(shù)差異和擴增錯誤等引起的潛在假陰性結(jié)果。