備型柱子柱壓上升，柱效下降，怎么辦？

對(duì)高的價(jià)值的制備柱來(lái)講，延長(zhǎng)柱子壽命是很重要的。一般要注意保護(hù)柱子，一般來(lái)說(shuō)，制備柱子一般需要保護(hù)柱配套。

下面是可能堵塞柱子的原因：

（1）如果您所分離的樣品中雜質(zhì)較多而您在上樣前沒(méi)有經(jīng)過(guò)過(guò)濾（0.45微米），一些顆粒性雜質(zhì)會(huì)積聚在柱頭造成柱壓升高。

（2）也有可能是因?yàn)槟褂玫牧鲃?dòng)向中含有緩沖鹽的原因，結(jié)晶或發(fā)生化學(xué)變化而堵塞?？梢园阎記_一沖。

（3）流動(dòng)相是否符合液相色譜的要求？是否過(guò)濾處理？

反相色譜分離純化后，怎樣除去流動(dòng)相產(chǎn)品中的TFA和乙腈或其他雜質(zhì)？

TFA是反相色譜分離中常用的添加劑?？梢杂脙龈傻霓k法去除，國(guó)外許多文獻(xiàn)是這樣報(bào)道的。還可以試試離子交換、凝膠層析、甚至透析和超濾，其中，離子交換層析效果比較好，還可以起到濃縮樣品的作用。

首先，凍干的辦法應(yīng)該可以幾乎完全地除去TFA和乙腈，藥品實(shí)驗(yàn)前盡量先檢測(cè)一下凍干品中的殘留量，只要不超過(guò)允許范圍，這種辦法是很簡(jiǎn)單、有效的。

其次，如果你的藥品的分裝量不大的話(<100ug)，建議你用離子交換層析，盡量裝一個(gè)小一點(diǎn)兒的柱子，讓含鹽洗脫峰的蛋白濃度達(dá)10mg/mL以上，稀釋后完全符合試驗(yàn)要求。如果用分子篩，考慮稀釋，盡量也先過(guò)一個(gè)離子交換。此外可以試試疏水層析。如果產(chǎn)品是堿的話，可能會(huì)形成TFA鹽，這樣通過(guò)上述方法就無(wú)法除去。一般可以用堿水洗，然后將產(chǎn)品萃取出來(lái)?；蛘咴诶锩婕尤胍欢康柠}酸，再干燥后形成鹽酸鹽。

同一種填料的分析柱、制備柱按線形放大公式套，分離度會(huì)不會(huì)變化？

一般會(huì)有一定的變化，原因有以下幾點(diǎn)：

（1）制備柱的裝填是否均勻，如不均勻則可能產(chǎn)生渦流擴(kuò)散使各個(gè)組分的經(jīng)過(guò)通道的直徑不同、阻力不一樣，停留時(shí)間不同，色譜峰可能變寬。

（2）如果樣品在流動(dòng)相中溶解度小，在制備色譜上會(huì)有不同的峰展寬。

（3）如果樣品在分析柱上有展寬或拖尾的現(xiàn)象，放大到制備柱上后峰的展寬和拖尾經(jīng)常會(huì)非常嚴(yán)重，導(dǎo)致分離失敗。

制備色譜柱如何測(cè)柱效？

可以選擇幾種物質(zhì)，苯，萘、蒽等的衍生物上柱，流動(dòng)相一般用65-80%的甲醇/水，測(cè)定后根據(jù)保留時(shí)間計(jì)算塔板數(shù)。由于制備色譜的管路死體積一般比較大，很難得到和供應(yīng)商相同的柱效。建議在制備柱開(kāi)始使用時(shí)在自己的色譜上測(cè)一下柱效，然后定期檢測(cè)柱效進(jìn)行以進(jìn)行比較。

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