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武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術公司;公司實驗中心有分子生物學平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。原位雜交對照試驗同組織化學染色對照一樣,為證明原位雜交實驗操作的準確性和實驗結果的特異性,需要設置一系列對照實驗,具體的各種對照實驗的設置及其意義請參考原位雜交專著,以下僅介紹幾種常用的對照實驗。
原位雜交天1. 重新水化和固定1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的PBST溶液,放置5分鐘。2) 置換成30%的PBST溶液,放置5分鐘3) 置換成PBST溶液,放置5分鐘,重復一次4) 置換成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘5) 用PBST洗兩次,每次放置五分鐘,室溫。此方法有很高的敏感性和特異性,可進一步從分子水平來探討細胞的功能表達及其調節(jié)機制。用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理,5體節(jié)到24小時的胚胎處理3分鐘,24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發(fā)育時間越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶處理,發(fā)育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織,以便于雜交。
武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術公司;公司實驗中心有分子生物學平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。用已裝防水黑色繪圖墨水的針頭穿透濾膜直至瓊脂,在3個以上的不對稱位置作標記。
熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是在20世紀80年代末在性原位雜交技術的基礎上發(fā)展起來的一種非性分子細胞遺傳技術,以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法,探針首先與某種介導分子(reporter molecule)結合
武漢思特進科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實驗技術研發(fā)、實驗產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實驗項目承接為一體的高新技術公司;公司實驗中心有分子生物學平臺、細胞平臺、光鏡平臺、植物組培平臺、原核蛋白表達平臺、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺;可以開展各類動、植物、細菌、細胞等生物實驗。同時在熒光原位雜交基礎上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術和染色質纖維熒光原位雜交技術。
基因組原位雜交(Genome in situ hybridization,GISH)技術是20世紀80年代末發(fā)展起來的一種原位雜交技術。它主要是利用物種之間DNA同源性的差異,用另一物種的基因組DNA以適當?shù)臐舛茸鞣庾瑁诎腥旧w上進行原位雜交。2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,放置30分鐘,重復一次。GISH技術應用于動物方面的研究(Pinkel et al.,1986),在植物上早應用于小麥和栽培種的鑒定(余舜武等 2001;王文奎等 2000)。