武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業(yè)從事生物醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)、技術(shù)咨詢及產(chǎn)品開發(fā)的生物技術(shù)服務(wù)企業(yè)。公司坐落于武漢光谷，由3位歸國(guó)博士創(chuàng)辦?；驑孏DS-80轟擊時(shí)氦氣罐的氣壓為1300psi，取10μLDNA包裹好的微粒懸浮液加到基因槍中央，進(jìn)行轟擊，之后放置25℃避光過(guò)夜培養(yǎng)，使用ConfocalLaser激光共聚焦顯微鏡觀察。公司長(zhǎng)期致力于建立并完善多項(xiàng)基礎(chǔ)生物技術(shù)服務(wù)平臺(tái)。現(xiàn)憑借自身技術(shù)特色，依托光谷生物城技術(shù)產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢(shì)，面向全國(guó)提供生物技術(shù)服務(wù)。

蛋白分布在細(xì)胞中的各個(gè)位置，其中蛋白豐度高，種類豐富的研究比較深入。定位注釋結(jié)果準(zhǔn)確的區(qū)域有細(xì)胞核，原生質(zhì)體，線粒體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等，植物還有葉綠體和液泡。注意:1、不建議將爬片泡酸后高壓滅菌，首先玻片太薄高壓容易使玻片變形，其次濕滅很容易使玻片上留下水漬影響細(xì)胞貼壁。而對(duì)于定位在細(xì)胞膜，分泌蛋白或者定位在多個(gè)區(qū)域的蛋白來(lái)說(shuō)，其亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè)信息一般準(zhǔn)確性較低。

通過(guò)對(duì)目的蛋白的標(biāo)記，例如融合綠色熒光蛋白GFP，使用掃描共聚焦顯微鏡激發(fā)熒光，從而對(duì)蛋白的表達(dá)分布予以確認(rèn)。依據(jù)對(duì)亞細(xì)胞分布的準(zhǔn)確度不同，亞細(xì)胞定位的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)也分成簡(jiǎn)化型亞細(xì)胞定位分析和內(nèi)參型共定位分析。以單細(xì)胞RNA-seq技術(shù)為基礎(chǔ)的轉(zhuǎn)錄組學(xué)分析技術(shù)的革命性提升，實(shí)現(xiàn)了單細(xì)胞內(nèi)部數(shù)以千萬(wàn)個(gè)轉(zhuǎn)錄本的同時(shí)檢測(cè)，完整地勾勒出各細(xì)胞活動(dòng)之間的動(dòng)態(tài)關(guān)聯(lián)。對(duì)于植物蛋白的亞細(xì)胞定位分析，主要通過(guò)構(gòu)建融合熒光蛋白的過(guò)表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)化煙1草和原生質(zhì)體瞬時(shí)表達(dá)體系確定其定位及共定位情況。

原理：構(gòu)建編碼目bai標(biāo)蛋白和熒光蛋du白的融合蛋白的載體，轉(zhuǎn)染細(xì)胞，表zhi達(dá)，然后激光共聚焦顯微鏡dao觀察熒光信號(hào)所在位置，即可知道該蛋白的亞細(xì)胞定位。注意做空載熒光蛋白的對(duì)照。

具體步驟：構(gòu)建目標(biāo)蛋白與GFP的融合蛋白的瞬時(shí)表達(dá)載體，基因槍轟擊洋蔥內(nèi)表皮細(xì)胞，或化學(xué)（PEG）轉(zhuǎn)化原生質(zhì)體，瞬時(shí)表達(dá)后用熒光顯微鏡觀察熒光位置，當(dāng)然激光共聚焦圖片會(huì)更漂亮。