菌種保藏的目的、原理及常用的方法有哪些？

微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過(guò)程中，必須使微生物的代謝處于不活躍或相對(duì)靜止的狀態(tài)，才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。

低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以，菌種保藏方法雖多，但都是根據(jù)這三個(gè)因素而設(shè)計(jì)的。

保藏方法大致可分為以下幾種：

1．傳代培養(yǎng)保藏法

又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細(xì)菌用），培養(yǎng)后于4—6℃冰箱內(nèi)保存。

2．液體石蠟覆蓋保藏法

是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種存活率，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。

3．載體保藏法

是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。

4．寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲(chóng)、此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。

5．冷凍保藏法

可分低溫冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6．冷凍干燥保藏法

先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。

低溫生物菌種知多少？

實(shí)驗(yàn)室菌種的傳代保藏過(guò)程

1. 按菌種說(shuō)明書(shū)要求復(fù)溶菌粉，轉(zhuǎn)種于適當(dāng)?shù)脑鼍囵B(yǎng)基內(nèi)（G1），復(fù)壯后轉(zhuǎn)接至平板上，并于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間，分離出單個(gè)純種菌落，此為第2代（G2）。

2. 菌種鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，同時(shí)挑取純菌落轉(zhuǎn)接斜面菌種作為工作用菌種。此時(shí)，保藏菌種為第2代，但工作用菌種則為第三代。

3. 將第2代菌種管冷凍保存，將工作用菌種于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后可用于試驗(yàn)。

4. 取一支冷凍保存的G2代菌種轉(zhuǎn)種于平板和斜面培養(yǎng)基上，平板上的菌種制成冷凍保藏管第三代（G3），斜面培養(yǎng)基經(jīng)適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后用作工作用菌種（W3）。

5. 將第三代菌種（G3）冷凍或低溫保存，將生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)種后的G2菌種經(jīng)滅菌處理后丟棄。

6. 當(dāng)工作用菌種代數(shù)小于5時(shí)，可直接用上一代工作用菌種轉(zhuǎn)接下一代工作用菌種，如W3可直接轉(zhuǎn)接為W4。

7. 按上述程序操作，直至G4轉(zhuǎn)為W5為止，需重新開(kāi)啟安瓿，再重復(fù)上述操作程序、保藏和使用菌種。

以上方法中，菌種被分為兩類。傳代用菌種和工作用菌種，傳代用菌種用于甘油冷凍管法保藏，工作用菌種用斜面低溫保藏法保藏。

實(shí)驗(yàn)證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于細(xì)菌（需氧）、酵母菌的傳代、保藏、真菌和芽孢類細(xì)菌則需應(yīng)用其它方法。