為避免提取的核酸在柜內(nèi)反復(fù)循環(huán)，造成標(biāo)本之間的交叉污染，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，該區(qū)域配備的生物安全柜必須是B2型的。生物安全柜工作區(qū)垂直氣流全部來(lái)自實(shí)驗(yàn)室，排風(fēng)經(jīng)過(guò)過(guò)濾器(www.rfilter.com)過(guò)濾后直接排至室外，不允許回到安全柜和實(shí)驗(yàn)室中。

根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，如果實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配備生物安全柜，每配備一臺(tái)，實(shí)驗(yàn)室的面積增加10m2;標(biāo)本制備區(qū)的面積宜在25m2~30m2之間。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)檎龎?，以避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。

擴(kuò)增室該區(qū)域主要進(jìn)行的操作為DNA或cDNA擴(kuò)增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來(lái)自樣本制備區(qū))的加入和主反應(yīng)混合液(來(lái)自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應(yīng)混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。

在巢式PCR測(cè)定中，通常在輪擴(kuò)增后必須打開(kāi)反應(yīng)管，因此巢式擴(kuò)增有較高的污染危險(xiǎn)性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進(jìn)行。

擴(kuò)增室主要配備PCR實(shí)驗(yàn)室的核心儀器PCR儀，本文實(shí)例中使用了ABI7500和ABI9700兩種PCR儀。

在實(shí)驗(yàn)室建造過(guò)程中，需要給PCR儀配備專門的UPS電源，以保證其正常工作。該區(qū)面積控制在15m2~20m2。

本區(qū)的壓力梯度要求為:相對(duì)于鄰近區(qū)域?yàn)樨?fù)壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動(dòng)。個(gè)別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。建議采用5~10Pa壓差，在控制上比較容易實(shí)現(xiàn)。

集成式核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室優(yōu)勢(shì)

無(wú)需改造現(xiàn)有實(shí)驗(yàn)室，直接補(bǔ)充專用PCR實(shí)驗(yàn)室，快速形成對(duì)冠狀病毒的檢測(cè)能力；更加安全，嚴(yán)格按照P2(BSL-2)實(shí)驗(yàn)室要求進(jìn)行設(shè)置，在工廠完成第三方驗(yàn)收，保證實(shí)驗(yàn)人員安全；防護(hù)，有效的廢棄物、廢氣、廢水的收集和處理措施，保證周邊環(huán)境和人員安全；實(shí)施簡(jiǎn)單，現(xiàn)場(chǎng)只需要預(yù)留配電（約30KW）、給水接口（或水箱）、污水（或?qū)Ｓ眯⌒臀鬯幚硌b置）；實(shí)施時(shí)間短，現(xiàn)場(chǎng)僅需4小時(shí)即能安裝、調(diào)試完成；轉(zhuǎn)運(yùn)快速，可進(jìn)行機(jī)動(dòng)式快速轉(zhuǎn)運(yùn)，能對(duì)疫情嚴(yán)重地區(qū)進(jìn)行快速的補(bǔ)充；升級(jí)簡(jiǎn)單，可配套增加血常規(guī)、生化模塊實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行檢測(cè)能力的升級(jí)，具備完整發(fā)熱檢驗(yàn)科能力；成本低廉，僅需54萬(wàn)元就能實(shí)施完成，遠(yuǎn)低于同類改造實(shí)驗(yàn)室價(jià)格；配備基礎(chǔ)檢測(cè)設(shè)備每天可實(shí)現(xiàn)768人份樣品檢測(cè)，配置高通量自動(dòng)化檢測(cè)設(shè)備可實(shí)現(xiàn)3072人份檢測(cè)能力。

注：檢測(cè)設(shè)備不包括在此次配置內(nèi)

低配：每2小時(shí)檢測(cè)一批次，每批次可檢測(cè)96人/份，每天可檢測(cè)8批次，每天可檢測(cè)：8*96＝768人份；

高配：每2小時(shí)檢測(cè)一批次，每批次可檢測(cè)384人/份，每天可檢測(cè)8批次，每天可檢測(cè)：8*384＝3072人份。

集成式核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)依據(jù)

集成式核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)主要根據(jù)以下規(guī)范及要求進(jìn)行設(shè)計(jì)、建設(shè)：

?新型冠狀病毒的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指南(第三版)?機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法2010?GB 50346-2011 生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范?GB19489-2008 實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求?GB50849-2014 ：建筑設(shè)計(jì)規(guī)范?GB50686-2011 ：建筑施工及驗(yàn)收規(guī)范?GB/T35428-2017 ：醫(yī)院負(fù)壓隔離病房環(huán)境控制要求?WS 233-2002微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則

PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)PCR實(shí)驗(yàn)室如何分區(qū)？應(yīng)該分3區(qū)還是4區(qū)呢？

標(biāo)準(zhǔn)的PCR實(shí)驗(yàn)室可分成4個(gè)區(qū)域，按操作流程包括：

1）

試劑準(zhǔn)備區(qū)：擴(kuò)增試劑的配制、分裝、保存。

2）

樣本制備區(qū)：樣本分裝，核酸提取、保存。

3）

核酸擴(kuò)增區(qū)：提取純化的核酸上機(jī)擴(kuò)增。

4）

產(chǎn)物分析區(qū)：擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)果分析，生成報(bào)告。

隨著核酸檢測(cè)方法的優(yōu)化和實(shí)驗(yàn)儀器的功能強(qiáng)化，PCR實(shí)驗(yàn)走向了自動(dòng)化和高通量，這大大降低了病毒檢測(cè)的時(shí)間、提高了檢測(cè)的效率，也改變了普通PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的平面布局。如全自動(dòng)定量PCR實(shí)驗(yàn)室可設(shè)置為試劑制備區(qū)、樣本處理區(qū)、核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)，后兩個(gè)區(qū)合并（用于新冠病毒檢測(cè)的PCR實(shí)驗(yàn)室）。一體化自動(dòng)化PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)置試劑制備和自動(dòng)檢測(cè)區(qū)，后三個(gè)區(qū)合并