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Tris常用作生物緩沖液,常配成pH值為6.8,7.4,8.0,8.8。其結(jié)構(gòu)式,pH值隨溫度變化很大。一般來說,溫度每升高一度,PH值下降0.03。Tris被廣泛應用于生物化學和分子生物學實驗中的緩沖液的制備。例如,在生物化學實驗中常用的TAE和TBE緩沖液(用于核酸的溶解)都需要用到Tris。由于它含有氨基因此可以與醛發(fā)生縮合反應。Tris為弱堿,在室溫(25℃下,它的pKa為8.1;根據(jù)緩沖理論,Tris緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0到9.2之間。Tris堿的水溶液pH在10.Chemicalbook5左右,一般加入鹽酸以調(diào)節(jié)pH值至所需值,即可獲得該pH值的緩沖液。
Tris本身呈堿性,只用Tris-HCl緩沖體系即可配制pH范圍由酸性到堿性的緩沖液,方法也較為簡單,而且還可以與其他物質(zhì)組成多種緩沖體系;對生物化學過程干擾很小,也不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。但是,Tris緩沖液的pH值受溶液濃度和溫度影響較大,稀釋十倍,緩沖液的pH值變化大于0.1,溫度每升高一度,pH值下降0.03;同時其易吸收空氣中的CO2,所以配制的緩沖液要蓋嚴密封。
Tris通常被用于核酸DNA或RNA的瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液,通常用的緩沖體系有TAE、TBE、TPE等,即生物緩沖劑Tris配合EDTA以及醋酸、硼酸、磷酸等配制成的緩沖溶液。不同公司使用的緩沖液有所差異,相對來說使用磷酸的TPE較少,主要是使用TAE和TBE緩沖液。在做核酸瓊脂糖凝膠電泳時,首先的準備工作就是制備凝膠,瓊脂糖凝膠做的好壞直接影響電泳效果和效率。這個制作過程耗時較長,節(jié)約時間考慮也可以直接購買制備好的預制凝膠。
TBST緩沖液 TBST中含有Tris-HCl,NaCl,tween20這三種物質(zhì),是做Western Blotting中常用的一種洗膜緩沖液。目的是洗掉非特異性吸附的蛋白質(zhì),并且維持一個接近的天然環(huán)境。其中,Tween是一種離子表面活性劑,可加速非特異性結(jié)合的分離。因為Western Blotting中所用的膜可以與蛋白質(zhì)結(jié)合,孵育過程中,能夠與膜非特異性結(jié)合。為了防止以后曝光造成膠片背景太高,在孵育后,混有Tween 20的TBS 能夠?qū)⒎翘禺愋越Y(jié)合的洗掉,增加特異性。