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ELISA試劑盒的組成結(jié)構(gòu)
1、 操作過程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
此IBL試劑盒能用于小鼠清,EDTA血漿,細(xì)胞上清中白介素-6的定量檢測。
ELISA試劑盒——ELISA實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則
1、溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。
Elisa試劑盒的注意事項(xiàng)
Elisa試劑盒是否滅活:加熱可滅清中補(bǔ)體系統(tǒng),在較少數(shù)情況下(培養(yǎng)ES細(xì)胞,平滑肌細(xì)胞時(shí))建議滅活,在培養(yǎng)其余細(xì)胞時(shí)不建議滅清。滅活非常容易產(chǎn)生沉淀,如必須滅活請按56℃,30 min,輕微搖晃原則操作,滅活溫度高、時(shí)間長、搖晃不均都容易產(chǎn)生沉淀。
Elisa試劑盒培養(yǎng)基:無培養(yǎng)基在結(jié)果重復(fù)性、細(xì)胞體外分化方面有優(yōu)勢,但是,仍然是培養(yǎng)液中基本的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或細(xì)胞生長狀態(tài)不良時(shí),常常會先使用有的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),待細(xì)胞生長旺盛后再換成培養(yǎng)液。
Elisa試劑盒——Elisa實(shí)驗(yàn)常見問題及解決方案
不正常的標(biāo)準(zhǔn)曲線
1 錯誤的方法重懸標(biāo)準(zhǔn)品 加入正確量的溶液重懸標(biāo)準(zhǔn)品,重懸充分
2 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯誤 按照說明書要求稀釋標(biāo)準(zhǔn)品
3 標(biāo)準(zhǔn)品污染 使用一次性的滅菌吸頭, 標(biāo)準(zhǔn)品貯存于2-8 ℃
4 錯誤的倍比稀釋步驟 按照說明書倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品
5 波長選擇錯誤 TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用,而 前者比色波長為450nm,后者為492nm。雙波長比色分析優(yōu)于單波長。
6 標(biāo)準(zhǔn)品混用 不同批號試劑勿混用
7 試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長,溫度太高,標(biāo)準(zhǔn)品失活 盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間,夏季應(yīng)放冰塊降溫
8 ELISA未終止而直接檢測450nm和620nm TMB顯色需終止后檢測,否則會出現(xiàn)620nm比450nm讀數(shù)高的現(xiàn)象。(數(shù)值仍有梯度規(guī)律)