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ELISA試劑盒的組成結構
1、 操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
此IBL試劑盒能用于小鼠清,EDTA血漿,細胞上清中白介素-6的定量檢測。
ELISA試劑盒的分類
檢測抗體及酶結合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗操作者準確地做稀釋工作,保證實驗結果的重復性。
ELISA試劑盒主要實驗原理
·包被:抗原或者能以物理性吸附于固相載體表面,原因是蛋白質和聚乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,吸附之后能保持抗原反應等活性;
·標記:抗原或者可通過共價鍵與酶連接成酶結合物,而此種酶結合物仍能保持其活性和酶的催化特點;
·顯色:酶結合物與相應包被在固相載體的抗原或者結合后,也被固定在固相載體上,加入酶的底物之后可出現顯色反應,根據反應的顏色深淺可計算抗原或者的相對含量。