熒光分光光度計

熒光分光光度計是用于掃描液相熒光標記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強度、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù)，從各個角度反映了分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數(shù)的測定， 不但可以做一般的定量分析, 而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構象變化， 從而闡明分子結構與功能之間的關系。熒光分光光度計的激發(fā)波長掃描范圍一般是190~650nm，發(fā)射波長掃描范圍是200~800nm。可用于液體、固體樣品（如凝膠條）的光譜掃描。

熒光分光光度計的構成

1. 光源：為氙弧燈，后者能發(fā)射出強度較大的連續(xù)光譜，且在300nm～400nm 范圍內(nèi)強度幾乎相等，故較常用。

2．激發(fā)單色器：置于光源和樣品室之間的為激發(fā)單色器或一單色器，篩選出特定的激發(fā)光譜。

3．發(fā)射單色器：置于樣品室和檢測器之間的為發(fā)射單色器或第二單色器，常采用光柵為單色器。篩選出特定的發(fā)射光譜。

4． 樣品室：通常由石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。測量液體時，光源與檢測器成直角安排；測量固體時，光源與檢測器成銳角安排。

5． 檢測器：一般用光電管或光電倍增管作檢測器?？蓪⒐庑盘柗糯蟛⑥D為電信號。

熒光光譜體系間跨越

是處于激發(fā)態(tài)分子的電子發(fā)生自旋反轉而使分子的多重性發(fā)生變化的過程。分子由激發(fā)單重態(tài)跨越到激發(fā)三重態(tài)后，熒光強度減弱甚至熄滅。含有重原子如碘、等的分子時，體系間跨越為常見，原因是在髙原子序數(shù)的原子中，電子的自旋與軌道運動之間的相互作用較大，有利于電子自旋反轉的發(fā)生。另外，在溶液中存在氧分子等順磁性物質(zhì)也容易發(fā)生體系間跨越，從而使熒光減弱。