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熒光分光光度計是紫外嗎
熒光分光光度計不是紫外,這是兩個不同的概念。
紫外分光光度計檢測物質(zhì)環(huán)境的要求較低。其應(yīng)用波長范圍為200~400nm的紫外光區(qū)、400~850nm的可見光區(qū)。
熒光分光光度計檢測物質(zhì)要求環(huán)境高,微量檢測,結(jié)果較準(zhǔn)確,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。在溶液中,當(dāng)熒光物質(zhì)的濃度較低時,其熒光強度與該物質(zhì)的濃度通常有良好的正比關(guān)系,即IF=KC,利用這種關(guān)系可以進(jìn)行熒光物質(zhì)的定量分析,對被測物質(zhì)要求高。相比較,熒光光度計較準(zhǔn)確。
熒光光譜儀
根據(jù)波茲曼 (Boltzmann)分布,分子在室溫時基本上處于 電子能級的基態(tài)。當(dāng)吸收了紫外-可見光后,基態(tài)分子中的電子只能躍遷到激發(fā)單重態(tài)的各個不同振動-轉(zhuǎn)動能級,根據(jù)自旋禁阻選律, 不能直接躍遷到激發(fā)三重態(tài)的各個振動-轉(zhuǎn)動能級。處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的,通常以輻射躍遷和無輻射躍遷等方式釋放多余的能 量而返回至基態(tài),發(fā)射熒光是其中的一條途徑。振動弛豫(vibrational relexation)是處于激發(fā)態(tài)各振動能級的分子通過與溶劑分子的碰攛而將部分振動能量傳遞給溶劑分子,其電子則返回到同一電子激發(fā)態(tài)的低振動能級的過程。由于能量不是以光輻射的形式放出,故振動弛豫屬于無輻射躍遷。振動弛豫只能在同一電子能級內(nèi)進(jìn)行,發(fā)生振動弛豫的時間約為 秒數(shù)量級。內(nèi)部能量轉(zhuǎn)換( internal conversion)簡稱內(nèi)轉(zhuǎn)換,是當(dāng)兩個電子激發(fā)態(tài)之間的能量相差較小以致其振動能級有重疊時,受激分子常由高電子能級以無輻射方式轉(zhuǎn)移至低電子能級的過程。
熒光光譜
熒光分析的第二個特點是選擇性強,特別是對有機化合物而言。因熒光光譜既包括激發(fā)光譜又包括發(fā)射光譜,凡是能發(fā)射熒光的物質(zhì),必須首先吸收一定波長的紫外線,而吸收了紫外線后不一定就發(fā)射熒光。能發(fā)射熒光的物質(zhì),其熒光波長也不盡相同。如果即使熒光光譜相同的話,而它的激光光譜也不一定相同。反之如果它們的激發(fā)光譜相同,則可用發(fā)射光譜把它們區(qū)分開來,因此供選擇的余地是比較多的。所以熒光分析的選擇性很強。例如有兩種物質(zhì),它們的熒光光譜很相似,不易把它們分開。但它們的激光光譜不會相同,因此就可用掃描激光光譜把它們分開。如果用分光光譜法就難以辦到這一點,因為分光光譜只能得到待測物質(zhì)的特征吸收光譜。所以分光光譜法的選擇性就沒有熒光分析法強。
熒光產(chǎn)率
熒光產(chǎn)率(φf)是熒光物質(zhì)另一個基本參數(shù),它表示物質(zhì)發(fā)生熒光的能力,數(shù)值在0~1之間。熒光效率是熒光輻射與其他輻射和非輻射躍遷競爭的結(jié)果。 kf為熒光發(fā)射過程的速率常數(shù), ∑ki為其他有關(guān)過程的速率常數(shù)總和。一般來說, kf主要決定于化學(xué)結(jié)構(gòu),而 ∑ki主要決定于化學(xué)環(huán)境,同時也與化學(xué)結(jié)構(gòu)有關(guān)。熒光光譜已應(yīng)用于很多不同領(lǐng)域,特別是需要無損、顯微、化學(xué)分析、成像分析的場合。無論是需要定性還是定量的數(shù)據(jù),熒光分析都能快速、簡便地提供重要信息。