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視頻作者:商丘騰飛生物科技有限公司
Tris-HCl緩沖液優(yōu)點(diǎn)堿性較強(qiáng),可以只用這一種緩沖液配置由酸到堿的范圍pH緩沖液;對生物化學(xué)過程干擾很小,不與鈣、鎂離子及重金屬離子發(fā)生沉淀。Tris-HCl緩沖液缺點(diǎn)pH受濃度影響較大,稀釋10倍,pH變化大于0.1溫度效應(yīng)大,除了Tris-HCl之外,tris還有多種衍生緩沖液:TBS=Tris-HCl NaCl KCl,常用于清洗染色的組織或Western Blotting中的蛋白印跡膜等;TBST=Tris-HCl NaCl tween20,做Western Blotting中常用的一種洗膜緩沖液;TE=Tris-HCl EDTA,對DNA的堿基有保護(hù)性,常被用于DNA的穩(wěn)定和儲存;TAE=Tris base 乙酸 EDTA,是大片段DNA短時間電泳時廣泛使用的緩沖系統(tǒng);TBE=Trisbase 硼酸 EDTA,適用于長時間DNA電泳,對較小片段分離效果較好。
緩沖液是一種能在加入少量酸或堿和水時抵抗pH改變的溶液.PH緩沖系統(tǒng)對維持生物的正常pH值,正常生理環(huán)境起重要作用.多數(shù)細(xì)胞僅能在很窄的pH范圍內(nèi)進(jìn)行活動,而且需要有緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現(xiàn)的pH變化.在生物體中有三種主要的pH緩沖體系,它們時蛋白質(zhì)、重碳酸鹽緩沖體系.每種緩沖體系所占的分量在各類細(xì)胞和中是不同的.

三羥甲基氨基甲烷的酸和鹽濃度相等時,緩沖液的緩沖效率為高,比例相差越大,緩沖效率越低,一般地說緩沖液有效緩沖范圍為PK±1pH.從上述可知,只要知道緩沖對的PK值,和要配制的緩沖液的pH值(及要求的緩沖液總濃度)時,可按公式計算出[鹽]和[酸]的量.這樣算涉及到對數(shù)的換算,較麻煩,前人為減少后人的計算麻煩,經(jīng)計算已為我們總結(jié)出pH值與緩沖液對離子用量的關(guān)系列出了表格.講義附錄部分節(jié)錄有磷酸緩沖液的配制表.只要我們知道要配制的緩沖液的pH,經(jīng)查表便可計算處所用緩沖劑的比例和用量.例如配制500nmpH5.8濃度為0.1M磷酸緩沖液.