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微透析系統(tǒng)
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目前測定回收率的方法主要有以下幾種:1,外標(biāo)法計算被測物質(zhì)相對濃度的變化時, 可簡單地采用體外回收率法。測定宜在取樣后立即進(jìn)行, 將探針放入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液中, 用與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)相同的流速灌流探針。達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)后收集灌流液并進(jìn)行檢測。測定濃度與標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度之比就是體外回收率。此法雖簡單易行, 但由于被測物質(zhì)在體外時與體內(nèi)的環(huán)境狀況不同, 檢測結(jié)果不能嚴(yán)格地等同于實(shí)際的回收率。由其公司的名字,可以了解到CMA公司之主要產(chǎn)品為微透析設(shè)備:一種zui新的生物采樣技術(shù),可用于或清醒的生物上,對醫(yī)學(xué)、藥學(xué)、生命科學(xué)等領(lǐng)域,提供嶄新技術(shù)的發(fā)展空間,目前以此技術(shù)發(fā)展的已有千篇以上。2,內(nèi)標(biāo)法往灌流液中加入已知濃度且性質(zhì)與被分析物質(zhì)相似的另一種物質(zhì)做內(nèi)標(biāo),內(nèi)標(biāo)物不僅在擴(kuò)散性質(zhì)上與被分析物一致,而且還要在體內(nèi)的代謝過程中也盡可能一致,測出透析率即作為被分析物的回收率。由于選擇內(nèi)標(biāo)的局限性很大, 限制了此法的應(yīng)用。3,反透析法假設(shè)被測物從兩個方向通過半透膜是同等的。在灌流液中加入一定濃度的內(nèi)標(biāo)物(Cic) ,在與體內(nèi)透析相同的條件下操作, 測定透析液中內(nèi)標(biāo)物的濃度(Cec) ,體內(nèi)回收率(Rin ,vivo ) 可用下式計算:Rin vivo = (1 Cec/ Cic) ×100 %本法要求內(nèi)標(biāo)物具有生物惰性, 盡可能與被測物相似。
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微透析探針是微透析實(shí)驗(yàn)中重要的組成部分。所有CMA的探針除了線性探針之外,都是采用同心圓的結(jié)構(gòu)來制作的。探針兩個端口,入口端和出口端。所用容器為PCR96孔板或500ul離心管(將離心管放在收集器的孔板上用來盛放收集的樣品)。一個內(nèi)部的導(dǎo)管能使灌流液從探針的入口端直接流到探針的頂端,隨之灌流液則會充滿半透膜和導(dǎo)管之間的區(qū)域,之后灌流液繼續(xù)沿著外管從出口流出。探針的所有金屬部分都經(jīng)過預(yù)處理以防止灌流液中的易變成分發(fā)生氧化。
清醒的動物在做CNS的微透析實(shí)驗(yàn)時,在植入探針之前需要在動物醉狀態(tài)下先植入-個套管,等大鼠清醒要插入探針時,可以把套管中的假探針拔出,再插入真正的探針開始實(shí)驗(yàn),這樣就不用在動物手術(shù)時就植入探針,保證探針的使用效率。
CMA (全名CMA/MICRODIALYSIS AB)成立于1984年, 是一家以研究為導(dǎo)向的高科技公司。 總部設(shè)于瑞典斯德哥爾摩, 其創(chuàng)辦人為瑞典的KAROLINSKA學(xué)院藥理大師URBAN UNGERSTEDT,任諾貝爾獎病理學(xué)醫(yī)學(xué)評委。 上世紀(jì)70年代初,西班牙Delgado及瑞典URBAN UNGERSTEDT等人首先提出了“微透析”的概念。腦微透析測定方法研究腦微透析方法研究主要分為三種,分別為離線檢測、在體檢測和電化學(xué)檢測研究。微透析(Microdialysis)是一種從生物體內(nèi)進(jìn)行動態(tài)微量生化取樣的新技術(shù), 可用于麻或清醒的生物上, 具有體連續(xù)取樣、動態(tài)觀察、定量分析、采樣量小、組織損傷輕等特點(diǎn)。