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發(fā)布時(shí)間:2020-12-01 11:55  







                                                            低溫生物菌種的脫水存法

①沙土保存法,能產(chǎn)孢子的細(xì)菌、線菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合,經(jīng)稀酸處理洗凈過(guò)篩,裝入小試管內(nèi),裝置高度為1cm;滅菌2~3次,烘干后即可將在斜面培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好的孢子,用無(wú)菌蒸餾水2~2.5ml制成孢子懸液,吸取少許加入沙土管中,經(jīng)真空抽干,外觀呈松散狀態(tài),于4℃冰箱保存,保存期可達(dá)5~7年。
② 冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護(hù)劑(一般用脫脂牛奶)相混合,放在安瓿管內(nèi)于-20~-30℃的乙醇浴中速凍。然后,在低溫下用真空泵抽干,并用干冰使水汽結(jié)凍,熔封安瓿管,于低溫下保存。保存期可達(dá)5~10年之久。

③ 石蠟油封存法,在斜面菌種培養(yǎng)物上,倒上滅菌后的石蠟油,高出斜面1cm,于4℃冰箱或低溫干燥處保存,此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物,保存期為一年以上。






                                                       低溫生物菌種的冰凍是怎樣的?

生物體的新陳代謝是隨著溫度的降低而減緩的。如果低溫在0℃以上,這個(gè)減緩過(guò)程一般是可逆的,即溫度回升以后,新陳代謝的速度也隨之恢復(fù)。但如溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí),生物體常因結(jié)冰而發(fā)生不可恢復(fù)的損傷。因?yàn)樗械纳矬w體液都含有大量的水(一般在80%左右),細(xì)胞器也都懸浮于水溶液中,新陳代謝過(guò)程都是在水溶液或膜和水溶液的界面上進(jìn)行的,所以在結(jié)冰的過(guò)程中,一方面由于水的晶體──冰晶硬度較大,對(duì)于生物體內(nèi)的精細(xì)結(jié)構(gòu)會(huì)造成機(jī)械損傷;另一方面由于水結(jié)冰,使細(xì)胞內(nèi)失去了大量可利用的水,造成脫水現(xiàn)象,從而使精細(xì)結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞。




低溫生物菌種的改良制備

即采用遺傳育種的方法,使菌株(從自然界分離篩選而得的出發(fā)菌株)的遺傳因子 DNA發(fā)生突變、重組,從而從中選出產(chǎn)量高、成品質(zhì)量好或具有新的培養(yǎng)特性如耐產(chǎn)物抑制、能利用廉價(jià)原料以及具有生產(chǎn)新品種能力的優(yōu)良菌種。采用的方法有誘變育種、雜交育種、細(xì)胞融合技術(shù)和重組DNA技術(shù)。誘變育種是利用誘變因子如紫外線、鈷-60、乙烯類(lèi)等物理或化學(xué)誘變劑處理生產(chǎn)菌株的單孢子懸浮液,以獲得誘發(fā)突變株。隨后進(jìn)行突變株的篩選,從中篩選高產(chǎn)菌株。由于隨機(jī)的突變?nèi)后w中,有益突變所占比例很低,要獲得高產(chǎn)突變株必須進(jìn)行大量篩選。可根據(jù)生物合成途徑中的反應(yīng)點(diǎn),并通過(guò)它們的改變以提高產(chǎn)率或其他特性,如選育抗產(chǎn)物反饋抑制的突變株、增加細(xì)胞透性的突變株及營(yíng)養(yǎng)缺陷型的突變株等。這種"理性篩選法"廣泛應(yīng)用于氨基酸產(chǎn)生菌的選育。




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