實(shí)驗(yàn)步驟

使用前將各種試劑取出放置30分鐘，平衡至室溫。所有標(biāo)準(zhǔn)品和樣品必需設(shè)置平行對(duì)照實(shí)驗(yàn)。

快速加入試劑至樣品中，立即漩渦震蕩2秒混勻。

1. 依據(jù)實(shí)驗(yàn)鍵盤(pán)紙決定酶標(biāo)條的使用量，將剩余的酶標(biāo)條連同干燥劑一起放回密封塑料袋，密封，4℃保存。

2. 移取50μL中和液至各個(gè)微孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

3. 移取100μL 0.1M HCl至NSB(非特異結(jié)合)孔和B0孔(0 pmol/mL cAMP標(biāo)準(zhǔn)品)。

4. 移取100μL cAMP標(biāo)準(zhǔn)品至相應(yīng)的孔。

5. 移取100μL樣品至相應(yīng)的孔。

6. 移取50μL 0.1M HCl至NSB(非特異結(jié)合)孔。7. 移取50μL 偶聯(lián)酶至各孔中，除了TA(全活性)孔和Blank(空白)孔。

8. 移取50μL 抗l體工作液至各孔中，除了TA(全活性)孔、Blank(空白)孔和NSB(非特異結(jié)合)孔。

9. 將酶標(biāo)孔置于孔板振動(dòng)器上，250~500rpm，室溫孵育2小時(shí)。

10. 在吸水紙上拍干微孔內(nèi)溶液，加洗滌液400μL每孔洗3次，每次需拍干。

11. 后一次洗滌，清空各微孔，在干凈的無(wú)塵吸水紙上輕巧酶標(biāo)板數(shù)次，以確保沒(méi)有洗滌液殘留。

12. 加5μL 偶聯(lián)酶至TA(全活性)孔。

13. 每孔200μL顯色底物溶液，于室溫靜置5~30分鐘。（顯色底物A和B需在臨用前15分鐘內(nèi)等體積混合，并避光放置。）

14. 每孔加入50μL終止液。終止后立即讀數(shù)。

15. 清除酶標(biāo)l儀Blank(空白)孔值，讀取450nm處的光密度值，在570nm至590nm之間有修正。如果酶標(biāo)l儀不能自動(dòng)清除Blank(空白)孔值，那么手動(dòng)扣除每個(gè)讀數(shù)的Blank(空白)孔光密度值。

靈敏度

通過(guò)比較10個(gè)B0孔平均光密度值(OD)和10個(gè)5號(hào)管標(biāo)準(zhǔn)品的平均光密度值，計(jì)算出靈敏度。cAMP濃度的檢測(cè)極限通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線上0位置的兩個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)測(cè)定。

OD(B0平均數(shù)) =0.685± 0.003

OD（5號(hào) 標(biāo)準(zhǔn)品平均數(shù)）=0.604± 0.010

光密度偏差(0-0.4 pmol/mL) =0.081

2 SD's of the Zero Standard =0.006

靈敏度 =081.0006.0/0.8×0.4 pmol/mL =29.6 fmol/mL

武漢紐斯特生物科技有限公司（WuhanNewEastBiotechonologyCo.Ltd），系美國(guó)生命科學(xué)試劑供應(yīng)商美國(guó)NewEastBio在中國(guó)的子公司。公司位于武漢東湖高新技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)光谷生物城.美國(guó)NewEastBio專(zhuān)注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域，主要產(chǎn)品有小分子、ELISA試劑盒、蛋白等。

Elisa生物試驗(yàn)是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免l疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。ELISA檢測(cè)試劑盒適用于體外定性檢測(cè)人血l清或血漿中的抗人類(lèi)戊型肝l炎（HEV）病毒 IgM 抗l體ELISA檢測(cè)。


酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇要求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)加入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。