熒光分光光度計種類

熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點，可以廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機和無機化學(xué)等領(lǐng)域。熒光分光光度計的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計，自動記錄式熒光分光光度計，計算機控制式熒光分光光度計三個階段；熒光分光光度計還可分為單光束式熒光分光光度計和雙光束式熒光分光光度計兩大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計，配有壽命和相分辨測定的熒光分光光度計等。

熒光分光光度計的功能特點

1． 熒光發(fā)射光譜選擇某一固定波長的光激發(fā)樣品，記錄樣品中產(chǎn)生的熒光發(fā)射強度與發(fā)射波長間的函數(shù)關(guān)系，即得熒光發(fā)射光譜。

2． 熒光激發(fā)光譜選定某一熒光發(fā)射波長記錄熒光發(fā)射強度作為激發(fā)光波長的函數(shù)，即得熒光激發(fā)光譜。

3．時間分辨技術(shù)；可用于對混合物中光譜重疊但有壽命差異的組分進(jìn)行分辨并分別測量。時間分辨熒光測定公式如下：P(t) = P0 EXP (-t /τ)式中P(t)：擬合指數(shù)函數(shù)P0：強度取值EXP：指數(shù)運算符t：時間取值τ：熒光平均時間壽命

熒光分光光度計測試注意事項

①樣品應(yīng)盛在四面透光的石英比色皿（熒光池）中，如果是揮發(fā)性樣品應(yīng)使用帶塞的熒光池。

②在熒光分析時，為了得到穩(wěn)定且可靠的數(shù)據(jù)，一般需要開機預(yù)熱氙燈大約30min。如果儀器光源采用的是閃爍氙燈，預(yù)熱時間可以縮短到10min左右。對某些易感光、易分解的熒光物質(zhì)，盡量采用長波長、低人射光強度及短時間光照。

③溫度變化可引起熒光強度的改變。通常降低溫度，有利于提高熒光量的子產(chǎn)率，熒光強度增大。溫度影響熒光強度的顯著程度因樣品而異，大部分熒光物質(zhì)的熒光強度受溫度影響不大，測試溫度變化不超過±3℃，對測試結(jié)果幾乎無影響。

④當(dāng)熒光物質(zhì)是弱酸或弱堿時，溶液的pH對熒光強度有較大影響。因為弱酸或弱堿在不同酸度中，分子和離子的電離平衡會發(fā)生改變，而熒光物質(zhì)的熒光強度會因其離解狀態(tài)發(fā)生改變。

⑤分子結(jié)構(gòu)中存在π-π共軛的熒光物質(zhì)在極性溶劑中，熒光效率顯著增強。溶液中表面活性劑的加入能夠顯著提高熒光強度。

⑥瑞利散射和拉曼散射是溶劑的兩種散射光，應(yīng)注意不要誤把瑞利散射和拉曼散射光譜當(dāng)做熒光光譜。瑞利散射光波長與激發(fā)光波長相同，拉曼散射與激發(fā)光波長不同，而熒光物質(zhì)的熒光波長與激發(fā)光波長無關(guān)，因此可以通過選擇適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)波長將拉曼散射光與熒光分開。在測試時選擇合適的狹縫寬度，或者空白扣除，也可以對散射光的影響進(jìn)行校正。

⑦熒光物質(zhì)分子與溶液中其它物質(zhì)分子之間作用導(dǎo)致熒光強度降低，常見的熒光猝滅劑，如鹵素離子、重金屬離子、硝基化物質(zhì)、重氮化合物等。

⑧測試過程中注意不要肉眼盯著氙燈光源看，以防眼睛造成損傷。

⑨儀器房應(yīng)注意經(jīng)常通風(fēng)，避免產(chǎn)生的臭氧在室內(nèi)富集。

熒光光譜

熒光分析法是指利用某些物質(zhì)被紫外光照射后處于激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)分子經(jīng)歷一個碰撞及發(fā)射的去激發(fā)過程所發(fā)生的能反映出該物質(zhì)特性的熒光，可以進(jìn)行定性或定量分析的方法。由于有些物質(zhì)本身不發(fā)射熒光（或熒光很弱），這就需要把不發(fā)射熒光的物質(zhì)轉(zhuǎn)化成能發(fā)射熒光的物質(zhì)。例如用某些試劑（如熒光染料），使其與不發(fā)射熒光的物質(zhì)生成絡(luò)合物，各種絡(luò)合物能發(fā)射熒光，再進(jìn)行測定。因此熒光試劑的使用，對一些原來不發(fā)熒光的無機物質(zhì)和有機物質(zhì)進(jìn)行熒光分析打開了大門，擴展了分析的范圍。