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用于傳統(tǒng)小分子的分離方法如重結晶、精餾等對生物分子具有破壞性,因此基本上不能用于生物大分子分離純化,使得生物大分子的分離面臨極大挑戰(zhàn)。層析技術具有極高的分離純化效率,且條件溫和,在分離純化過程中容易保持生物分子的活性,因此層析技術已成為生物分離的主要的工具。層析分離過程是把混合樣品從裝有層析柱的一端進去,由于不同生物分子其尺寸、電荷、疏水等物理性能有差異,使得其與層析柱填充的介質作用力(或吸附強度)不同,導致不同分子在層析柱保留時間不同,因此不同組分的分子可以按順序從柱子另外一端流出來以達到分離的目的。層析分離效果主要取決于其層析柱中的層析介質微球。由于層析分離純化技術牽涉到材料、生物、化學等交叉技術領域,因此層析介質制備技術門檻高,用于生物分離的層析介質中國基本依賴進口。
孔徑均一的整體柱用于分離純化病毒
目前所使用的大部分層析柱都是填充柱,即將做好的微球介質填充到柱管中。這種用微球介質填充的層析柱容易放大,質量穩(wěn)定,重復性好等優(yōu)點,已被廣泛地用于生物制藥分離純化,如抗l生素,胰島素,抗l體等大規(guī)模分離純化都是采用這種方法。但這種方法用于分離純化病毒有局限性,主要是由于具有超大孔結構且機械強度好的介質微球制備技術難度大。而整體柱由于具有孔徑大、孔隙率大、通透性好、機械強度高、壓力低、高通量等優(yōu)點,有利于病毒及病毒類(疫l苗)生物大分子的分離純化。
之一:單分散基球替代多分散基球 層析介質粒徑大小和粒徑分布是影響層析分離的重要參數。粒徑分布越均勻,裝柱越容易、柱床越穩(wěn)定、柱效越高、流速越均勻、洗脫越集中、分離效率越高、流動相用量越少,柱與柱重復性也越好;Protein A 介質被譽為層析介質皇冠上的明珠,價格昂貴,可是市場上Protein A 介質都是采用粒徑分布較寬的基球。主要原因是單分散微球制備技術難度極大,世界上可以規(guī)模生產的單分散多孔微球只有Dynal公司一家,GE銷售的SOURCE 系列單分散聚l色譜填料就是Dynal生產的。但SOURCE 產品的粒徑只有30微米,不能滿足Protein A 介質對粒徑一般要大于40微米的要求。納微經過多年的努力開發(fā)出世l界領l先的微球精準制備技術,突破大單分散大粒徑多孔微球的制備難題,成為全球家生產單分散Protein A 親和層析介質的公司。