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原位雜交試驗(yàn)
收集斑馬魚的胚胎,在Holfretor水中培養(yǎng),到達(dá)所需要的發(fā)育時(shí)期時(shí),用蛋白酶去除卵膜,用4%多聚甲醛固定,在4℃保存,二十四小時(shí)后用50%甲6醇2%多聚甲醛溶液洗,然后換成甲9醇,在-20C 保存,待用(兩天和兩天以上的胚胎需要用雙氧6水處理,去除色素?;蛘呤褂帽斤畴逑∪芤号囵B(yǎng),可阻斷色素的形成)
雜交流程
雜交液的成分主要影響了核酸雜交的復(fù)性動(dòng)力學(xué)和熱穩(wěn)定性。雜交液的基礎(chǔ)成分為:Denhardt’s溶液(Ficoll,BSA,PVP),異源核酸(如鯡精3子DNA/tRNA/競(jìng)爭(zhēng)DNA),磷酸鈉,EDTA,SDS,鹽離子,甲酰胺和硫酸葡聚糖,以及雜交探針。不同的應(yīng)用中進(jìn)行雜交溫度、pH、鹽離子、甲酰胺、探針濃度等條件的優(yōu)化。常用的pH范圍為6.5~7.5,較高的pH值有助于提高雜交的嚴(yán)謹(jǐn)性。
多彩色熒光原位雜交技術(shù):顯而易見,是熒光原位雜交的升級(jí)版,采用多個(gè)熒光來(lái)檢測(cè),目前的發(fā)展及運(yùn)用也是較多的。
原位PCR:將原位雜交結(jié)合PCR技術(shù)發(fā)展起來(lái)的實(shí)驗(yàn)方法。
基因組原位雜交技術(shù):該技術(shù)在我們的領(lǐng)域可能運(yùn)用的畢竟少,主要是根據(jù)物種DNA同源性差異實(shí)現(xiàn),在農(nóng)作物等的雜交育種上運(yùn)用較廣,
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。