熒光分光光度計(jì)種類

熒光光譜法具有靈敏度高、選擇性強(qiáng)、用樣量少、方法簡便、工作曲線線形范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，可以廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)、藥學(xué)和藥理學(xué)、有機(jī)和無機(jī)化學(xué)等領(lǐng)域。熒光分光光度計(jì)的發(fā)展經(jīng)歷了手控式熒光分光光度計(jì)，自動記錄式熒光分光光度計(jì)，計(jì)算機(jī)控制式熒光分光光度計(jì)三個(gè)階段；熒光分光光度計(jì)還可分為單光束式熒光分光光度計(jì)和雙光束式熒光分光光度計(jì)兩大系列。其他的還有低溫激光Sh p ol’skill熒光分光光度計(jì)，配有壽命和相分辨測定的熒光分光光度計(jì)等。

熒光光譜特點(diǎn)

靈敏度更高  g/ml，應(yīng)用不如UV廣泛。應(yīng)用：①直接熒光光度法②作為HPLC的檢測器（用的多）根據(jù)物質(zhì)分子吸收光譜和熒光光譜能級躍遷機(jī)理，具有吸收光子能力的物質(zhì)在特定波長光（如紫外光）照射下可在瞬間發(fā)射出比激發(fā)光波長長的光，即熒光。 分子受特定光照射后處于激發(fā)態(tài)的 分子返回基態(tài)時(shí)發(fā)出熒光, 其熒光強(qiáng)度與 呈線性關(guān)系, 從而可測出氣體濃度。當(dāng)檢測儀器系統(tǒng)確定后，熒光總光強(qiáng)I與 濃度的之間的關(guān)系可表示為：I=KC在穩(wěn)定的條件下，這些參數(shù)也隨之確定，k可視為常數(shù)。因此，式中I=kC表示的紫外熒光光強(qiáng)I與樣氣的濃度C成線性關(guān)系。這是紫外熒光法進(jìn)行定量檢測的重要依據(jù)。

熒光光譜儀

根據(jù)波茲曼 （Boltzmann）分布，分子在室溫時(shí)基本上處于 電子能級的基態(tài)。當(dāng)吸收了紫外-可見光后，基態(tài)分子中的電子只能躍遷到激發(fā)單重態(tài)的各個(gè)不同振動-轉(zhuǎn)動能級，根據(jù)自旋禁阻選律, 不能直接躍遷到激發(fā)三重態(tài)的各個(gè)振動-轉(zhuǎn)動能級。處于激發(fā)態(tài)的分子是不穩(wěn)定的，通常以輻射躍遷和無輻射躍遷等方式釋放多余的能 量而返回至基態(tài)，發(fā)射熒光是其中的一條途徑。振動弛豫（vibrational relexation）是處于激發(fā)態(tài)各振動能級的分子通過與溶劑分子的碰攛而將部分振動能量傳遞給溶劑分子，其電子則返回到同一電子激發(fā)態(tài)的低振動能級的過程。由于能量不是以光輻射的形式放出，故振動弛豫屬于無輻射躍遷。振動弛豫只能在同一電子能級內(nèi)進(jìn)行，發(fā)生振動弛豫的時(shí)間約為 秒數(shù)量級。內(nèi)部能量轉(zhuǎn)換（ internal conversion）簡稱內(nèi)轉(zhuǎn)換，是當(dāng)兩個(gè)電子激發(fā)態(tài)之間的能量相差較小以致其振動能級有重疊時(shí)，受激分子常由高電子能級以無輻射方式轉(zhuǎn)移至低電子能級的過程。

淺析熒光光譜

無論分子初處于哪一個(gè)激發(fā)單重態(tài)，通過內(nèi)轉(zhuǎn)換及振動弛豫，均可返回到激發(fā)單重態(tài)的低振動能級，然后再以輻射形式發(fā)射光而返回至基態(tài)的任一振動能級上,這時(shí)發(fā)射的光稱為熒光。由于振動弛豫和內(nèi)轉(zhuǎn)換損失了部分能童，故熒光的波長總比激發(fā)光波長要長。發(fā)射熒光的過程為 秒。由于電子返回基態(tài)時(shí)可以停留在基態(tài)的任一振動能級上，因此得到的熒光譜線有時(shí)呈現(xiàn)幾個(gè)非?？拷姆?。通過進(jìn)一步振動弛豫，這些電子都很快地回到基態(tài)的低振動能級。