高效液相色譜的基本原理

色譜法的分離原理是：溶于流動(dòng)相(mobilephase)中的各組分經(jīng)過固定相時(shí)，由于與固定相(stationphase)發(fā)生作用(吸附、分配、排阻、親和)的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。又稱為色層法、層析法。高效液相色譜法以經(jīng)典的液相色譜為基礎(chǔ)，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相泵入裝有顆粒極細(xì)的高效固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)試樣的分析。

高效液相色譜法概述

高效液相色譜(HPLC)是20世紀(jì)60年代后期發(fā)展起來的分離分析技術(shù)，是現(xiàn)代分離測定的重要手段。問世以來，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點(diǎn)但不能氣化的熱不穩(wěn)定生理活性物質(zhì)的特點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)及臨床分析。

在現(xiàn)代高效液相色譜分析中，色譜柱的選擇直接影響了分離效果的好壞，選擇合適的色譜柱可以縮短方法開發(fā)所需的時(shí)間，并且使方法更具穩(wěn)定性。

高效液相色譜基本原理

液相色譜根據(jù)分離機(jī)理的不同可分為：

?液固吸附色譜

?液液分配色譜

?離子交換色譜

?離子對(duì)色譜法

?分子排阻色譜(或凝膠滲透色譜)

（一）液-固吸附色譜

流動(dòng)相為液體，固定相為固體吸附劑，根據(jù)物質(zhì)吸附作用的不同來分離物質(zhì)。

（二）液-液分配色譜

流動(dòng)相和固定相都是液體的色譜法即為液-液色譜，是利用樣品組分在兩種不相溶的液相間的分配來進(jìn)行分離。一種液相為流動(dòng)相，另一種是涂于載體上的固定相。

流動(dòng)相極性小于固定相極性的液-液色譜法稱為正相分配色譜法。

流動(dòng)相極性大于固定相極性的液-液色譜法稱為反相分配色譜法。

（三）離子交換色譜

（四）離子對(duì)色譜法

（五）分子排阻色譜法