反相色譜分離純化后，怎樣除去流動(dòng)相產(chǎn)品中的TFA和乙腈或其他雜質(zhì)？

TFA是反相色譜分離中常用的添加劑。可以用凍干的辦法去除，國(guó)外許多文獻(xiàn)是這樣報(bào)道的。還可以試試離子交換、凝膠層析、甚至透析和超濾，其中，離子交換層析效果比較好，還可以起到濃縮樣品的作用。

首先，凍干的辦法應(yīng)該可以幾乎完全地除去TFA和乙腈，藥品實(shí)驗(yàn)前盡量先檢測(cè)一下凍干品中的殘留量，只要不超過允許范圍，這種辦法是很簡(jiǎn)單、有效的。

其次，如果你的藥品的分裝量不大的話(<100ug)，建議你用離子交換層析，盡量裝一個(gè)小一點(diǎn)兒的柱子，讓含鹽洗脫峰的蛋白濃度達(dá)10mg/mL以上，稀釋后完全符合試驗(yàn)要求。如果用分子篩，考慮稀釋，盡量也先過一個(gè)離子交換。此外可以試試疏水層析。如果產(chǎn)品是堿的話，可能會(huì)形成TFA鹽，這樣通過上述方法就無(wú)法除去。一般可以用堿水洗，然后將產(chǎn)品萃取出來(lái)。或者在里面加入一定量的鹽酸，再干燥后形成鹽酸鹽。

制備色譜柱如何測(cè)柱效？

可以選擇幾種物質(zhì)，苯，萘、蒽等的衍生物上柱，流動(dòng)相一般用65-80%的甲醇/水，測(cè)定后根據(jù)保留時(shí)間計(jì)算塔板數(shù)。由于制備色譜的管路死體積一般比較大，很難得到和供應(yīng)商相同的柱效。建議在制備柱開始使用時(shí)在自己的色譜上測(cè)一下柱效，然后定期檢測(cè)柱效進(jìn)行以進(jìn)行比較。

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工業(yè)制備色譜

針對(duì)分離純化需求，開發(fā)了硅膠微球的制備方法，對(duì)硅膠微球的顆粒度、孔徑、孔體積、機(jī)械強(qiáng)度、化學(xué)穩(wěn)定性等進(jìn)行了調(diào)控和優(yōu)化，并且實(shí)現(xiàn)了硅膠微球的規(guī)?；a(chǎn)。針對(duì)各類樣品的特征和分離需求設(shè)計(jì)并合成了系列新型硅膠鍵合色譜固定相，并且實(shí)現(xiàn)了針對(duì)不同樣品分離需求的個(gè)性化分離材料設(shè)計(jì)與制備在分離材料的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了制備色譜方法開發(fā)研究，建立了從分析柱規(guī)模的色譜條件優(yōu)化以及模擬制備方法開發(fā)，到中試規(guī)模制備柱方法驗(yàn)證，等高放大到工業(yè)規(guī)模制備柱的制備色譜工藝開發(fā)。將發(fā)展的新型色譜分離材料和分離方法應(yīng)用于中藥、生物發(fā)酵和化學(xué)合成的分離純化制備3，實(shí)現(xiàn)了很好的工業(yè)化應(yīng)用。