樣品如果溶解度太低如何上制備HPLC？

（1）了解一下樣品的性質(zhì),根據(jù)其酸堿性,極性等性質(zhì)，通過調(diào)節(jié)溶劑的pH值等,以達(dá)到較好的溶解度。

（2）樣品可能某種晶型難溶，這樣可以加入其他溶劑以助溶。

（3）不是一定要用流動相來溶解樣品，對溶解度差的樣品，可以選擇甲醇，THF或DMSO等溶解樣品。特別是DMSO，對一般的化合物溶解度都很好。并且在反相柱上不保留，不會造成干擾。而且DMSO的洗脫能力很弱，一般不會影響峰型。

（4）可以固體上樣。

制備色譜之DAC如何次次裝出高柱效

動態(tài)軸向壓縮柱（Dynamic Axial Compression Column，DAC）是工業(yè)化制備液相色譜分離的重要組成部分。當(dāng)用戶填裝直徑50mm以上制備柱時，傳統(tǒng)預(yù)裝柱很難裝出高柱效和對稱性，另外預(yù)裝柱使用過程柱頭容易塌陷，導(dǎo)致柱效變差，無法滿足長期持續(xù)純化生產(chǎn)。DAC在運(yùn)行過程中，活塞可以提供持續(xù)壓力，保證很優(yōu)的填裝柱床密度和穩(wěn)定性，從而長時間保持很佳分離效果。相比于預(yù)裝柱或彈簧柱，DAC可以輕松填裝和拆卸，實現(xiàn)不同填料反復(fù)填裝和輕松切換。有人說大柱子不用考慮柱效和對稱性，只要能分出樣品就行?，F(xiàn)實是色譜就是靠柱效來分離的，柱效越高，分離越好，載量越大，收率和得率越高。

通常制備色譜方法開發(fā)在4.6mm，10mm或20mm的半制備柱，然后放大到DAC50或DAC100, DAC200，DAC300, DAC450, DAC600或DAC800。理論上多大規(guī)模的色譜柱都可以實現(xiàn)與分析柱或半制備柱同樣的效率，在現(xiàn)實中，設(shè)計優(yōu)良的DAC柱效甚至高于預(yù)裝柱。只有柱效和對稱性類似才能保證了分離方法的線性放大。

制備色譜的填充

填料是工業(yè)制備色譜的血脈，填料的選擇和利用是非常關(guān)鍵的，目前已有越來越多的產(chǎn)品應(yīng)用到IPC中。填料的化學(xué)性質(zhì)和物理性質(zhì)決定了色譜的分離性能和動力學(xué)性能。應(yīng)用于大規(guī)模工業(yè)化制備色譜中的填料具有如下特殊的要求。　　

1、機(jī)械強(qiáng)度高：填料需要承受很大的機(jī)械壓力，因為填料在IPC使用中，需要經(jīng)常裝卸，機(jī)械性能差的填料經(jīng)受不住反復(fù)填充，它們易破碎，產(chǎn)生細(xì)顆粒，降低柱滲透性，甚至堵塞濾片，造成流速分布不均勻，影響分離產(chǎn)物的純度，在系統(tǒng)中產(chǎn)生極高的柱壓而無法繼續(xù)使用引?！　?

2、負(fù)載量大：在IPC中，填料的負(fù)載量越大，則單位體質(zhì)量填料可處理的原料量就可增加，因而提高了產(chǎn)率。選擇合適孔徑及孔徑分布的填料是獲得高負(fù)載量的一個關(guān)鍵因素?！　?

3、可大量供應(yīng)，批間的重現(xiàn)性好：制備色譜工藝過程要擴(kuò)大，必須有可靠的供貨源提供大量填料，否則無法實現(xiàn)工業(yè)化。填料各批量之間的化學(xué)和機(jī)械穩(wěn)定性、孔結(jié)構(gòu)及可重復(fù)的比表面積等必須具有高度的重現(xiàn)性，否則難以保證長期、持續(xù)、穩(wěn)定的分離與純化生產(chǎn)工藝?！　?

4、合適的顆粒大小和窄的粒度分布范圍：細(xì)顆?？稍黾铀鍞?shù)及分辨率，但同時引起裝柱困難，需要更高的操作壓力。

工業(yè)制備色譜

蛋白質(zhì)的特點(diǎn)使得其分離過程與傳統(tǒng)化工分離過程有著極為不同的特點(diǎn):(1)分離對象是具有特定的生物活性的生物大分子產(chǎn)品，分離過程設(shè)計中不恰當(dāng)?shù)奈锢砗突瘜W(xué)環(huán)境等(如溫度、PH值、緩沖液選擇、、攪拌和剪切力等)皆有可能引起其蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，從而使之失活;(2)由于發(fā)酵液、細(xì)胞培養(yǎng)液或勻漿液中，我們所需要的目標(biāo)產(chǎn)物往往存在于含有許多性質(zhì)十分相似的雜質(zhì)的稀溶液中，如何從這樣一種復(fù)雜的稀溶液中經(jīng)濟(jì)有效地提取產(chǎn)物是生物分離技術(shù)面臨的重大課題;(3)從衛(wèi)生和安全角度出發(fā)，對于用基因工程產(chǎn)品，有著極高的純度和同一性要求，對其中的有害雜質(zhì)去除率要求極高，對分離設(shè)備材質(zhì)和分離過程中引入的分離介質(zhì)也有著嚴(yán)格的限制。