實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的制備液相色譜主要用于以下領(lǐng)域

1.天然藥品化學(xué)、中藥化學(xué)。這是國(guó)內(nèi)目前廣泛的使用方法，為了弄清楚植物中的微量有效成分，開(kāi)放手工色譜柱早已不夠用了，幾乎每個(gè)搞天然藥化的實(shí)驗(yàn)室都至少有一臺(tái)液相，土豪實(shí)驗(yàn)室人手一臺(tái)液相。

2.蛋白純化。相對(duì)于前者，蛋白純化的起步要稍微晚一點(diǎn)，但是發(fā)展很迅速。同時(shí)，由于外國(guó)儀器廠家在這個(gè)領(lǐng)域的優(yōu)勢(shì)不算太大，目前國(guó)內(nèi)也在這個(gè)領(lǐng)域加快發(fā)展，搶占地盤(pán)。

3.藥品雜質(zhì)純化。由于合成工藝并不能做到100%的產(chǎn)率，往往伴有副產(chǎn)品，如何獲得微量的雜質(zhì)并確定結(jié)構(gòu)和含量，這就得靠液相色譜。

4.手性化合物的制備。這個(gè)主要是有機(jī)合成和方法學(xué)的在用。

　　制備液相色譜的作用

由于液相色譜儀的溶質(zhì)分子在流動(dòng)相、靜態(tài)流動(dòng)相和固定相中的傳質(zhì)過(guò)程而導(dǎo)致的峰展寬。溶質(zhì)分子在流動(dòng)相和固定相中的擴(kuò)散、分配、轉(zhuǎn)移的過(guò)程并不是瞬間達(dá)到平衡,實(shí)際傳質(zhì)速度是有限的,這一時(shí)間上的滯后使色譜柱總是在非平衡狀態(tài)下工作,從而產(chǎn)生峰展寬.液相色譜儀的靈敏度高,分析速度快,操作方便等優(yōu)點(diǎn),但是受技術(shù)條件的限制,沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜法進(jìn)行分析。而液相色譜法,只要求試樣能制成溶液,而不需要?dú)饣?因此不受試樣揮發(fā)性的限制。

使用外力使含有樣品的流動(dòng)相通過(guò)一固定于柱中或平板上、與流動(dòng)相互不相溶的固定相表面.當(dāng)流動(dòng)相中攜帶的混合物流經(jīng)固定相時(shí),混合物中的各組分與固定相發(fā)生相互作用。 由于混合物中各組分在性質(zhì)和結(jié)構(gòu)上的差異,與固定相之間產(chǎn)生的作用力的大小、強(qiáng)弱不同,隨著液相色譜儀中流動(dòng)相的移動(dòng),混合物在兩相間經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的分配平衡,使得各組分被固定相保留的時(shí)間不同,從而按一定次序由固定相中先后流出。與適當(dāng)?shù)闹髾z測(cè)方法結(jié)合,實(shí)現(xiàn)混合物中各組分的分離與檢測(cè)。

液相色譜儀應(yīng)用范圍

它的應(yīng)用范圍比較大，而且有不斷拓展的趨勢(shì)。制備純化樣品是它的基礎(chǔ)功能，通過(guò)色譜分離，樣品中目標(biāo)物質(zhì)被分離出來(lái)有待進(jìn)一步研究，比如分離水樣中有機(jī)物、食品中以備分析等。然后是天然成分研究，有助于中藥學(xué)的發(fā)展。分析前人留下的珍貴藥典，通過(guò)藥性研究造福人類。提高產(chǎn)品質(zhì)量，以提高它的價(jià)值和效用，比如純化藥品、純化蛋白質(zhì)制品等。還有一個(gè)方向是用于產(chǎn)品合成的研究，通過(guò)獲得一些純度較高的化合物將以促進(jìn)合成實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。

液相色譜的操作步驟

1).首先對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾，根據(jù)需要選擇不同的濾膜，一般為有機(jī)系和水系，常用的孔徑為0.20um和0.45um。

2).對(duì)抽濾后的流動(dòng)相進(jìn)行超聲脫氣10-20分鐘。

3).正常情況下，儀器首先用甲醇沖洗10-20分鐘，然后再進(jìn)入測(cè)試用流動(dòng)相(如流動(dòng)相為緩沖試劑，則要二次重蒸水沖洗10-20分鐘，直至色譜柱中有機(jī)相沖凈為止)。

4).一般情況下，流動(dòng)相沖洗20-30分鐘后，儀器方可穩(wěn)定，重要的是儀器基線走后，方可進(jìn)樣測(cè)試。

5).同時(shí)進(jìn)兩針標(biāo)樣，將其結(jié)果相比較，其結(jié)果的比值在0.98-1.02之間后，就可以正式進(jìn)行樣品的測(cè)試了。

6).樣品測(cè)試結(jié)束后，就要進(jìn)行色譜儀及色譜柱的清洗和維護(hù)。如流動(dòng)相為緩沖試劑，同樣也要用重蒸水清洗10-20分鐘，方可用有機(jī)相進(jìn)行保護(hù)，否則，有損色譜柱。

7).關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)計(jì)算機(jī)，再關(guān)液相色譜。

8).填寫(xiě)登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。