你對制備色譜陌生嗎？還不進來看看它的特點

很多初接觸色譜領(lǐng)域的朋友對制備色譜這個名詞比較陌生。其實，在化學化工醫(yī)學等廣泛采用的層析法以及薄層色譜就是較為典型的制備色譜，換句話說，將分析色譜的進樣量增大，同時得出大量的所需物質(zhì)（餾分）的過程就可以稱為制備色譜。分析色譜的目的，是分析出混合物中一個（或者幾個）純物質(zhì)的含量。制備色譜的目的，是從混合物中得到純物質(zhì)。而制備色譜系統(tǒng)則是利用制備色譜的思想能得到純化物質(zhì)的多個分析測試設(shè)備聯(lián)用的總稱。     分析色譜是制備色譜的基礎(chǔ)。當我們在分析色譜上取得了良好的分離效果時，可以將其放大，應(yīng)用到制備色譜上，由此，我們需要考慮調(diào)整上樣量，流速，梯度：     

1.上樣量的調(diào)整：     他與分析色譜柱和制備色譜柱的柱長和柱內(nèi)徑有關(guān)：     

具體關(guān)系時；制備柱上樣量/分析柱上樣量=制備柱長/分析柱長*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方；     

2.流速的調(diào)整：     

制備柱流速/分析柱流速=制備柱體積/分析柱體積=制備柱長/分析柱長制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方；     

3.梯度的調(diào)整：     

制備柱梯度/分析柱梯度=制備柱體積/分析柱體積*制備柱流速/分析柱流速；

液相色譜儀的使用特點進行分析概要

　液相色譜儀是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上，引用了氣相色譜的理論，在技術(shù)中，流動相改為高壓輸送，色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜；同時柱后連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進行連續(xù)檢測?！　∫合嗌V儀特點：　　

1、高壓：液相色譜法以液體為流動相，液體流經(jīng)色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過色譜柱，必須對載液施加高壓。一般可達150～350×105Pa；　　

2、高速：流動相在柱內(nèi)的流速較經(jīng)典色譜快得多，一般可達1～10ml/min。液相色譜法所需的分析時間較之經(jīng)典液相色譜法少得多，一般少于1h；　　

3、效率很高：近來研究出許多新型固定相，使分離效率大大提高；　　

4、高靈敏度：液相色譜已廣泛采用高靈敏度的檢測器，進一步提高了分析的靈敏度。如熒光檢測器靈敏度可達10-11g。另外，用樣量小，一般幾個微升；　　

5、適應(yīng)范圍寬

液相色譜的應(yīng)用

(1)分離混合物液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動相可選擇的范圍寬，固定相的種類繁多，因而可以分離熱不穩(wěn)定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。通過與試樣預處理技術(shù)相配合，液相色譜法所達到的高分辨率和高靈敏度，可分離并同時測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)，能夠分離復雜混合物中的微量成分。并且隨著固定相的發(fā)展，還可在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成對其的分離。

(2)生化分析由于液相色譜法具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優(yōu)點，因而被廣泛應(yīng)用到生物化學、食品分析、藥的研究、環(huán)境分析、無機分析等各種領(lǐng)域，并已成為解決生化分析問題有前途的方法。

(3)儀器聯(lián)用液相色譜儀與結(jié)構(gòu)儀器的聯(lián)用是一個重要的發(fā)展方向。液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯多核芳烴等：液相色譜一紅外光譜聯(lián)用也發(fā)展很快，如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類等．使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。

液相色譜的操作步驟

1).首先對流動相進行過濾，根據(jù)需要選擇不同的濾膜，一般為有機系和水系，常用的孔徑為0.20um和0.45um。

2).對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。

3).正常情況下，儀器首先用甲醇沖洗10-20分鐘，然后再進入測試用流動相(如流動相為緩沖試劑，則要二次重蒸水沖洗10-20分鐘，直至色譜柱中有機相沖凈為止)。

4).一般情況下，流動相沖洗20-30分鐘后，儀器方可穩(wěn)定，重要的是儀器基線走后，方可進樣測試。

5).同時進兩針標樣，將其結(jié)果相比較，其結(jié)果的比值在0.98-1.02之間后，就可以正式進行樣品的測試了。

6).樣品測試結(jié)束后，就要進行色譜儀及色譜柱的清洗和維護。如流動相為緩沖試劑，同樣也要用重蒸水清洗10-20分鐘，方可用有機相進行保護，否則，有損色譜柱。

7).關(guān)機時，先關(guān)計算機，再關(guān)液相色譜。

8).填寫登記本，由負責人簽字。