制備色譜能當(dāng)分析色譜用嗎？

目前，很多客戶的要求都傾向于買一臺(tái)液相能同時(shí)解決制備和分析的所有問題，那就相當(dāng)OK。這樣的客戶大多是科研經(jīng)費(fèi)緊張，好不容易批下來點(diǎn)錢，不想都花在后期純化和分析上，所以盡量二合一。

在我看來，分析液相和制備液相是通用的，只是精度的差別問題。比如，分析的液相一般流速在0.1～10mL/min，活塞的一個(gè)沖程大概是10μL，而普通的制備液相一般都是10～100mL的流速，因此活塞桿的尺寸也會(huì)變大，一個(gè)沖程差不多是100μL；流速的精度相對(duì)來說就差了很多。流速大了，管路也相應(yīng)的粗了不少，以降低高流速帶來的背景壓力；但這樣的儀器用于分析的話，柱后的擴(kuò)散現(xiàn)象相當(dāng)?shù)膮柡?，即使在色譜柱上達(dá)到基線分離的兩個(gè)峰，由于柱后擴(kuò)散的作用，到達(dá)檢測器的時(shí)候，差不多又會(huì)合到一起了；另外就是檢測器的差異，主要是檢測池的大小和狹縫的大小不同帶來的靈敏度的不同。制備儀器一般靈敏度是分析的1/20，以保證大量進(jìn)樣后，不會(huì)超過量程太多而平頭，分不清到底分沒分開了。

倒是有個(gè)折中的辦法，就是買分析型的液相，然后接個(gè)半制備的色譜柱。半制備就是直徑一厘米的柱子，流速5mL以內(nèi)，因此這個(gè)分析液相能達(dá)到；進(jìn)樣量大約是分析柱的10～20倍，檢測器可能會(huì)平頭，沒關(guān)系，換個(gè)波長，找個(gè)吸收較弱的波長當(dāng)檢測波長就OK了，不是大量制備的話，我想基本可以滿足需要了。

備型柱子柱壓上升，柱效下降，怎么辦？

對(duì)高的價(jià)值的制備柱來講，延長柱子壽命是很重要的。一般要注意保護(hù)柱子，一般來說，制備柱子一般需要保護(hù)柱配套。

下面是可能堵塞柱子的原因：

（1）如果您所分離的樣品中雜質(zhì)較多而您在上樣前沒有經(jīng)過過濾（0.45微米），一些顆粒性雜質(zhì)會(huì)積聚在柱頭造成柱壓升高。

（2）也有可能是因?yàn)槟褂玫牧鲃?dòng)向中含有緩沖鹽的原因，結(jié)晶或發(fā)生化學(xué)變化而堵塞?？梢园阎記_一沖。

（3）流動(dòng)相是否符合液相色譜的要求？是否過濾處理？

同一種填料的分析柱、制備柱按線形放大公式套，分離度會(huì)不會(huì)變化？

一般會(huì)有一定的變化，原因有以下幾點(diǎn)：

（1）制備柱的裝填是否均勻，如不均勻則可能產(chǎn)生渦流擴(kuò)散使各個(gè)組分的經(jīng)過通道的直徑不同、阻力不一樣，停留時(shí)間不同，色譜峰可能變寬。

（2）如果樣品在流動(dòng)相中溶解度小，在制備色譜上會(huì)有不同的峰展寬。

（3）如果樣品在分析柱上有展寬或拖尾的現(xiàn)象，放大到制備柱上后峰的展寬和拖尾經(jīng)常會(huì)非常嚴(yán)重，導(dǎo)致分離失敗。

工業(yè)制備色譜

蛋白質(zhì)是具有一定構(gòu)象(空間結(jié)構(gòu))的生物大分子:其一級(jí)結(jié)構(gòu)是形成肽鏈的氨基酸序列(數(shù)目、種類、順序)，是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ);在一級(jí)結(jié)構(gòu)水平上，部分肽鏈發(fā)生卷曲和折疊，形成其二級(jí)結(jié)構(gòu)，這種卷曲和折疊是靠肽鏈中的羰基與氨基之間的氫鍵維持的:在二級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，多肽鏈再盤繞和折疊，形成三維空間形態(tài)，即為蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu):而蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)是指同一蛋白質(zhì)中各條肽鏈之間的相互關(guān)系。