如何用制備色譜柱制備低含量的雜質(zhì)？

制備色譜柱為ZorbaxSB-C18 9.4*250mm及gilson餾分收集器，色譜儀為Agilent1100或LC-6A。想用其制備面積歸一化法含量為0.05%左右的雜質(zhì)，初步提純后用高分辨的LC-MS進(jìn)行定性分析。如何設(shè)定色譜條件，如，流量、進(jìn)樣量、樣品的濃度、切割點(diǎn)的設(shè)置、是否要濃縮，要求將95%以上的主峰切除。

（主峰后有二個(gè)雜質(zhì)靠得很近。）

答：

1.制備用的流動(dòng)相盡量等級(jí)高一點(diǎn)，否則流動(dòng)相中的雜質(zhì)會(huì)影響LC-MS分析。

2.使用餾分收集器時(shí)，延遲體積一定要計(jì)算準(zhǔn)確，檢測(cè)器的響應(yīng)時(shí)間設(shè)到很小，否則都會(huì)影響收集的純度和回收率。制備柱的流速一般與直徑的平方成正比，如果4.6mm分析柱流速為1mL/min，9.4mm制備柱用1*（9.4/4.6）2,大約為4mL/min。進(jìn)樣量設(shè)到幾個(gè)mg應(yīng)該基本沒有過載。進(jìn)樣樣品濃度越高越好。假如進(jìn)樣10mg，理論計(jì)算0.05%的雜質(zhì)大約只有5μg，顯然濃度太低，盡量是多做幾次，合并餾分然后濃縮后做LC-MS分析。

制備色譜

制備色譜是以分離出純物質(zhì)為目的的色譜系統(tǒng)，分析色譜是以分析出樣品組分信息為目的的色譜系統(tǒng)，基于他們目的的不同，制備色譜相對(duì)于分析色譜有很多不同特征，不能簡(jiǎn)單等同。

當(dāng)我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室中想得到納克乃至毫克級(jí)的純物質(zhì)時(shí)，稍微改裝下分析型色譜系統(tǒng)就能簡(jiǎn)單輕松的完成，不過，若所需制備的純品量很大，此時(shí)，再用分析型色譜系統(tǒng)分離純化，可以預(yù)見這將是一場(chǎng)“災(zāi)難”。

制備色譜常用的色譜模式有低壓，中壓，高壓三種，以應(yīng)對(duì)不同類型和不同純度要求的樣品的分離，同時(shí)盡可能減少成本。

工業(yè)制備色譜

分離純化技術(shù)是制藥過程的核心環(huán)節(jié)之一。分離純化技術(shù)的優(yōu)劣直接關(guān)系到的品質(zhì)和安全性，而且影響到制藥企業(yè)的效益和市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，尋求經(jīng)濟(jì)、高效綠色的新型分離純化技術(shù)一直受到廣泛的重視。工業(yè)制備色譜技術(shù)具有高效、高選擇性、能耗和溶劑消耗低、廢棄物排放少以及自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)，在分離純化中的應(yīng)用和需求日益廣泛，是我國(guó)產(chǎn)業(yè)升級(jí)的重要發(fā)展方向工業(yè)制備色譜分離材料和分離方法開發(fā)是工業(yè)制備色譜技術(shù)實(shí)現(xiàn)在各方面應(yīng)用的基礎(chǔ)。

用于制備和生產(chǎn)的大規(guī)模生物分離技術(shù)所面臨的問題是:如何在不破壞目標(biāo)蛋白質(zhì)的生物活性的前提下(溫和的條件)，以很高的識(shí)別性，以及較高的分離能力和收率，經(jīng)濟(jì)有效地從稀溶液中提取、分離、純化目標(biāo)產(chǎn)物。吸附通常可以在常溫、水相、適當(dāng)?shù)膒H、離子強(qiáng)度、避免使用等有害的化學(xué)試劑等溫和的條件下操作，液相色譜具有很高的分離性能，適合于生物分離過程的要求。