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發(fā)布時間:2020-12-31 09:09  






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非洲為何難以控制?但磁珠法由于磁珠吸附DNA分子的不均衡、且在后續(xù)洗脫過程中會造成核酸的斷裂和損失,因此在疑難檢材的檢驗過程中,存在PCR擴增失敗,DNA檢驗不成功的情況。非洲病毒基因組全長 170~190 kb,為有囊膜的雙鏈 DNA 病毒,病毒粒子大小為 175~215 nm,呈正二十面體結(jié)構(gòu),也是唯i一的蟲媒DNA病毒。非洲病毒是一種急性、熱性、高度接觸性傳i染病,引起豬的死i亡率可達100%,并且非洲具有潛伏期,即使感i染病毒,但沒有臨床癥狀,就有可能通過非實驗室檢驗技術(shù)關卡流入市場,進而導致下游食品企業(yè)相關問題的出現(xiàn)。

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非洲與傳統(tǒng)相似且綜合癥狀復雜難辨,臨床上類似于急性,表現(xiàn)為高熱、皮膚充血、流i產(chǎn)、水腫和臟器出血。我國因之前不屬于非洲i疫情國家,因此沒有相關的針對性研究,目前采用的是原農(nóng)i業(yè)部檢疫所于1997年與美國梅島動物病研究所共同研究的檢測方法,主要是PCR和ELISA,標準遵循GB/T 18648-2002非洲診斷技術(shù)。隨著相關檢測技術(shù)的發(fā)展,對于非洲的檢測方法也更加完善。PCR技術(shù)是目前i簡單、快速的分子學檢測方法,但該方法的敏感性有限,因此以PCR為基礎的更新方法應運而生。復檢為陽性的,企業(yè)要在當?shù)厥袌霰O(jiān)管、畜牧獸醫(yī)部門監(jiān)督下,按規(guī)定對同批次生豬產(chǎn)品原料進行無害化處理,對相關場所進行徹i底清洗消毒。


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相對定量可以對每個樣本中模版的其實水平之間的差異進行精i確比較,沒必要知道模版的確切拷貝數(shù),并且樣本模板中的相對水平不用使用標準曲線就可以確定。相對定量分析以實時PCR方式執(zhí)行,在實時PCR分析過程中,PCR基因擴增一直在監(jiān)控中,在PCR進行期間進行數(shù)據(jù)采集,而不是在PCR結(jié)束時(終點PCR)才獲取數(shù)據(jù)。在實時PCR中,反應是在目標的擴增早被監(jiān)測到時用循環(huán)中的時間點來描述的,而不是在PCR結(jié)束時通過目標的累計數(shù)來描述。廣州勱博--養(yǎng)殖場PCRPCR檢測同熒光PCR類似,都是使用的引物和探針以VP72編碼區(qū)域作為靶基因設計,該基因研究清楚,且高度保守,即使在滅活或降解的樣品中也可檢測到已知所有22種p72病毒基因型的多個毒株。

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在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應是否特異。如測定病i人樣本中病原體的含量、實驗樣本中某一特定的mRNA的含量等。


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FQ-PCR在醫(yī)學栓測中有價值的應用領城就是對感i染性疾病的診斷,只要有限的核酸序列清楚,運用FQ-PCR技術(shù),檢測任何病原體。目前,對一些培養(yǎng)周期長或缺乏穩(wěn)定可靠的檢測手段的病原體,可以考慮用FQ-PCR檢測,為臨床診斷提供依據(jù)FQ-PCR對病原體的檢測克服了免i疫學檢測的“窗口期“問題,可判斷疾病是否隱性或亞臨床狀態(tài)。FQ-PCR技術(shù)可以應用于腫癟的研究及診斷。主要是利用磁珠純化核酸及蛋白質(zhì)從而達到提取核酸的目的,在細胞、動植物組織等研究方面,一個樣品用一個探針,有效防止樣品之間的交叉污染。

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實時熒光定量PCR的基本原理:理論上,PCR過程是按照2n(n代表PCR循環(huán)的次數(shù))指數(shù)的方式進行模板的擴增。不同的核酸序列,哪怕僅有一個堿基的差異,也會體現(xiàn)在熔解溫度的差別上。但在實際的PCR反應過程中,隨著反應的進行由于體系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰減)使得靶序列并非按指數(shù)方式擴增,而是按線性的方式增長進入平臺期。因此在起始模板量與終點的熒光信號強度間沒有可靠的相關性。如采用常規(guī)的終點檢測法(利用EB染色來判斷擴增產(chǎn)物的多少,從而間接的判斷起始拷貝量),即使起始模板量相同經(jīng)PCR擴增、EB染色后也完全有可能得到不同的終點熒光信號強度。



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