武漢邁斯普生物科技有限公司是一家專業(yè)從事生物醫(yī)學(xué)技術(shù)服務(wù)、技術(shù)咨詢及產(chǎn)品開發(fā)的生物技術(shù)服務(wù)企業(yè)。20世紀(jì)80年代后期，原位雜交技術(shù)開始應(yīng)用于植物基因表達(dá)調(diào)控的研究。公司坐落于武漢光谷，由3位歸國(guó)博士創(chuàng)辦。公司長(zhǎng)期致力于建立并完善多項(xiàng)基礎(chǔ)生物技術(shù)服務(wù)平臺(tái)?，F(xiàn)憑借自身技術(shù)特色，依托光谷生物城技術(shù)產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢(shì)，面向全國(guó)提供的生物技術(shù)服務(wù)。

尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析，已 成為的分子病理學(xué)技術(shù)，同時(shí)在分析低豐度和罕見的mRNA表達(dá)方面已展示了分子生物學(xué)的一重要方向。FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員，因其所用探針被熒光物質(zhì)標(biāo)記（間接或直接）而得名，該方法在80年代末 被發(fā)明，現(xiàn)已從實(shí)驗(yàn)室逐步進(jìn)入臨床診斷領(lǐng)域?；驹硎菬晒鈽?biāo)記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復(fù)性；通過熒光顯微鏡觀察熒光信號(hào)可在不改變被分析對(duì)象（即維持其原位）的前提下對(duì)靶核酸進(jìn)行分析。

雜交條件一般是37℃避光濕盒過夜。至少溫度要嚴(yán)格控制在37-40℃，過高或者過低都是不適合的。孵育時(shí)間也不要無(wú)限延長(zhǎng)，一般18-20h就肯定夠了，時(shí)間過久會(huì)造成自動(dòng)解鏈，造成信號(hào)降低。

漂洗液的溫度控制。很多人都覺得這個(gè)無(wú)所謂。小編個(gè)人認(rèn)為FISH實(shí)驗(yàn)是一個(gè)對(duì)溫度非常敏感的實(shí)驗(yàn)。保證漂洗液溫度為37℃而不是室溫，可能對(duì)于整個(gè)實(shí)驗(yàn)有比較良好的影響。

原位雜交在前。

（1）常規(guī)脫蠟入水。

（2）37℃蛋白酶K消化20min，37℃漂洗液充分洗去蛋白酶K。

（3）滴加探針，加蓋玻片，避光、濕盒、37℃過夜孵育。

（4）如果試劑盒允許的話，將試劑盒中洗脫液水浴加溫至37℃震蕩洗脫多余的探針。

（5）加堿性磷酸酶標(biāo)記的抗1體，37℃孵育半小時(shí)，洗去抗1體后顯色。

免1疫組化在后。

（1）將顯色后確認(rèn)為陽(yáng)性的切片充分漂洗。

（2）在PH為6.0的枸櫞酸鈉溶液中，微波至96℃左右，作用10min。

（3）滴加一抗，37℃濕盒孵育2h。

（4）充分漂洗切片，滴加二抗，室溫下孵育40-50min。

（5）DAB顯色后，采用PBS中止顯色反應(yīng)。

（6）不要復(fù)染核，不然就蓋住原位雜交信號(hào)了。