蛋白質(zhì)結(jié)晶方法

結(jié)晶方法(Crystallization Techniques)1.1.1 分批結(jié)晶(Batch Crystallization) 這是老的簡單的結(jié)晶方法，其原理是同步地在蛋白質(zhì)溶液中加入沉淀劑，立即使溶液達(dá)到一個(gè)高過飽和狀態(tài)。幸運(yùn)的話，不需進(jìn)一步處理即可在過飽和溶液中逐漸長出晶體。一個(gè)用于微分批結(jié)晶的自動(dòng)化系統(tǒng)已被Chayen等人設(shè)計(jì)出（1991，1992），其微分批方法中，他們在1-2μl包含蛋白質(zhì)和沉淀劑的液滴中生長晶體。液滴被懸浮在油（如石蠟）中，油的作用是作為封層以防止蒸發(fā)，它并不干擾普通沉淀劑，但是干擾能溶解油的(Chayen, 1997; see also Chayen, 1998)。

蛋白質(zhì)晶體板相互作用

蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)層次蛋白中的多肽鏈往往不是一個(gè)如圖4圖4所示完全伸展的鏈。L.C.鮑林和R.B.科里曾由氨基酸、小肽和有關(guān)化合物晶體結(jié)構(gòu)的測定中歸納了肽鍵的鍵長、鍵角等。鏈中肽鍵N-C的鍵長為1.32埃，具有40%的雙鍵成分，與周圍四個(gè)鍵是共面的，且N-H和C=O具有反式構(gòu)型。肽鍵因具雙鍵成分而無旋轉(zhuǎn)的自由，但它周圍的每個(gè)Cα原子與相鄰兩個(gè)肽鍵中的氮和碳原子所形成的Cα-N和Cα-C單鍵都具有較大的回旋余地，從而一個(gè)多肽鍵可能存在于不計(jì)其數(shù)的構(gòu)象或立體結(jié)構(gòu)中，其中有些構(gòu)象使未成鍵原子間形成較多較強(qiáng)的氫鍵并產(chǎn)生其他能使整個(gè)分子趨于穩(wěn)定的相互作用。

蛋白結(jié)晶板

獲取蛋白質(zhì)晶體是蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)解析,藥品生產(chǎn),自組裝納米體系構(gòu)建等過程中重要的步驟.例如,利用X射線衍射技術(shù)對蛋白質(zhì)進(jìn)行三維結(jié)構(gòu)解析時(shí),首先需要通過結(jié)晶條件篩選,獲得質(zhì)量較高的蛋白質(zhì)晶體,進(jìn)而進(jìn)行衍射得到蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)相關(guān)信息.蛋白質(zhì)結(jié)晶需要經(jīng)歷從未飽和區(qū)經(jīng)亞穩(wěn)區(qū)至形核區(qū)的形核過程以及從形核區(qū)到亞穩(wěn)區(qū)的生長成熟過程.在整個(gè)蛋白質(zhì)結(jié)晶過程中,形核過程是至關(guān)重要的一步.均相形核過程中,結(jié)晶體系中各個(gè)部分形核概率相同,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)結(jié)晶體系中溶液的過飽和度足夠克服形核勢壘時(shí),在形核區(qū)發(fā)生成核,因而在低濃度的結(jié)晶溶液體系中,均相形核存在一定的局限性。