PCR實驗室的相關(guān)設(shè)置

要完成一組PCR實驗，通常需要經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴增和產(chǎn)物分析4個實驗過程。

這4個實驗過程的實驗用房應(yīng)相鄰布置，組成一個獨立的PCR實驗區(qū)。標準的PCR實驗區(qū)包括:試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)、各區(qū)配套的緩沖區(qū)及公共走廊。

PCR實驗室整體平面布局某醫(yī)院PCR實驗室平面布局如圖1所示，整個區(qū)域有一個公用走廊，每個獨立實驗區(qū)設(shè)有專門的緩沖區(qū)。通過壓差控制，使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染，并且降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。

試劑準備區(qū)該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備。

試劑和用于標本制作的材料應(yīng)直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。

試劑準備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-80°C冰箱，計算冷負荷時，需要將它們計算在內(nèi)。

房間的面積宜控制在15m2~20m2。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對正壓狀態(tài)，以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進入，造成污染。

標本制備區(qū)該區(qū)域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定RNA時cDNA的合成。

標本制備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-20°C冰箱，計算冷負荷時，需要將它們計算在內(nèi)。在標本制備區(qū)，還需要配備生物安全柜，用于進行提取核酸的操作。

PCR實驗室建設(shè)PCR實驗室如何分區(qū)？應(yīng)該分3區(qū)還是4區(qū)呢？

標準的PCR實驗室可分成4個區(qū)域，按操作流程包括：

1）

試劑準備區(qū)：擴增試劑的配制、分裝、保存。

2）

樣本制備區(qū)：樣本分裝，核酸提取、保存。

3）

核酸擴增區(qū)：提取純化的核酸上機擴增。

4）

產(chǎn)物分析區(qū)：擴增產(chǎn)物結(jié)果分析，生成報告。

隨著核酸檢測方法的優(yōu)化和實驗儀器的功能強化，PCR實驗走向了自動化和高通量，這大大降低了病毒檢測的時間、提高了檢測的效率，也改變了普通PCR實驗室建設(shè)的平面布局。如全自動定量PCR實驗室可設(shè)置為試劑制備區(qū)、樣本處理區(qū)、核酸擴增和產(chǎn)物分析區(qū)，后兩個區(qū)合并（用于新冠病毒檢測的PCR實驗室）。一體化自動化PCR實驗室設(shè)置試劑制備和自動檢測區(qū)，后三個區(qū)合并