蛋白質(zhì)結(jié)晶方法

液-液擴(kuò)散(Liquid–Liquid Diffusion) 這種方法中，蛋白質(zhì)溶液和含有沉淀劑的溶液是彼此分層在一個(gè)有小孔的毛細(xì)管中，一個(gè)測(cè)熔點(diǎn)用的毛細(xì)管一般即可（如圖1.2）。下層是密度大的溶液，例如銨或PEG溶液。如果如MPD被用作沉淀劑，它會(huì)在上層。以1：1混合，沉淀劑的濃度應(yīng)該是所期終濃度的二倍。兩種溶液（各自約5μl）通過針頭導(dǎo)入毛細(xì)管，先導(dǎo)入下層的。通過一個(gè)簡(jiǎn)易的搖擺式離心機(jī)去除氣泡。再加入上層，進(jìn)而兩層之間形成一個(gè)明顯的界面，它們會(huì)逐漸彼此擴(kuò)散。 Garc′?a-Ruiz and Moreno（1994）已經(jīng)發(fā)展液-液擴(kuò)散技術(shù)至法。蛋白質(zhì)溶液通過毛細(xì)力被吸入狹窄的管中，管的一端是封閉的。接著，開放端入置于小容器的凝膠中，凝膠使得管豎直，蛋白質(zhì)溶液與凝膠接觸。含有沉淀劑的溶液被倒在凝膠上，整個(gè)裝置被保存于封閉的盒子以防蒸發(fā)。沉淀劑通過凝膠和毛細(xì)管的擴(kuò)散時(shí)間可以由毛細(xì)管插入凝膠的深度控制，從而蛋白質(zhì)溶液中即可形成過飽和區(qū)域，毛細(xì)管底部高而頂部低。這也可作為一個(gè)篩選佳結(jié)晶條件的額外信息。

蛋白質(zhì)結(jié)晶涉及四個(gè)重要步驟

1. 蛋白質(zhì)純度的確定。如果不夠非常純，必須要進(jìn)一步純化。

2. 蛋白質(zhì)溶解于合適的溶劑中，從中它能通過一種鹽或有機(jī)化合物而析出。溶劑通常是水-緩沖劑溶液，有時(shí)加，如2--2，4-（MPD）。正常情況下，沉淀劑也被加入，但是濃度不高于使沉淀產(chǎn)生。對(duì)于不溶于水-緩沖劑或水-的膜蛋白，還需要加入去污劑。

3. 使溶液過飽和。在這一步中，小聚集體形成，它是晶體生長(zhǎng)所需的核。對(duì)小分子的結(jié)晶來說，相比于蛋白質(zhì)更為人熟知，晶核的自發(fā)形成需要提供表面張力能。一旦這個(gè)能障被突破了，晶體開始生長(zhǎng)。能障在高水平的過飽和度時(shí)很容易克服。因此，在高過飽和度時(shí)，晶核更易自發(fā)形成。晶核的形成可作為一個(gè)過飽和度和其他參數(shù)的函數(shù)通過多種方法來研究，包括光散射、熒光去極化及電子顯微鏡。

4. 一旦晶核形成，晶體生長(zhǎng)正式開始。對(duì)低分子量的化合物而言，新分子會(huì)逐步結(jié)合到正在生長(zhǎng)的晶體表面。這是由于這些位置的結(jié)合能比較大，相對(duì)于分子結(jié)合到平滑的表面。這些步驟要么由晶系缺陷造成，要么發(fā)生在表面隨機(jī)形成的晶核。

蛋白結(jié)晶板方法

用于人工和高通量蛋白晶體生長(zhǎng)以及其他生物或有機(jī)晶體生長(zhǎng)的設(shè)備和方法.一微孔板包含多個(gè)單元格,以及一限定微孔板中單元格的邊框.在每個(gè)單元格中至少存在一個(gè)上部開口的孔.單元格中的每個(gè)孔底部可以封閉,或者其底部是開口的,但孔底部由一獨(dú)立部件封閉,其可以為獨(dú)立的膜或板(例如塑料,玻璃或金屬)或一模制部件。

蛋白質(zhì)結(jié)晶板

實(shí)用新型涉及一種蛋白質(zhì)結(jié)晶板,包括結(jié)晶板主體部分(10),以及在結(jié)晶板主體上以陣列形式分布的儲(chǔ)槽單元(20),每一所述儲(chǔ)槽單元(20)具有面板(240),在所述面板中間位置形成一凹槽,所述凹槽底部為第二面板(250),在所述第二面板中間位置或靠近一側(cè)的位置凹入形成儲(chǔ)槽(220),所述儲(chǔ)槽(220)至少一側(cè)的第二面板(250)中形成有至少一個(gè)滴液槽(230),所述面板(240)與第二面板(250)通過連接部(260)連接,所述結(jié)晶板主體部分(10)在其四周具有支撐部(300)。

設(shè)計(jì)并制作了一種在微腔中對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行微批量法(microbatch)結(jié)晶的碟式微流控結(jié)晶芯片,它是一種高通量、低成本、低耗樣量(納升級(jí))、操作簡(jiǎn)便的蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選方法,這種芯片能成功地結(jié)晶溶菌酶(lysozyme)和青色熒光蛋白(CyPet).為了系統(tǒng)地比較這種微流控芯片與傳統(tǒng)的使用蒸汽擴(kuò)散法的24孔結(jié)晶板的結(jié)晶能力,用3個(gè)Hampton結(jié)晶試劑盒