保藏的目的、原理及常用的方法有哪些？

微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過(guò)程中，必須使微生物的代謝處于不活躍或相對(duì)靜止的狀態(tài)，才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。

低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以，保藏方法雖多，但都是根據(jù)這三個(gè)因素而設(shè)計(jì)的。

保藏方法大致可分為以下幾種：

1．傳代培養(yǎng)保藏法

又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細(xì)菌用），培養(yǎng)后于4—6℃冰箱內(nèi)保存。

2．液體石蠟覆蓋保藏法

是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起存活率，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。

3．載體保藏法

是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。

4．寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲、此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。

5．冷凍保藏法

可分低溫冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6．冷凍干燥保藏法

先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。

                                                  低溫生物保藏有雙重“保險(xiǎn)”

作為我國(guó)可同時(shí)提供一般資源服務(wù)和生物材料保存的保藏中心，保藏中心于1995年被列入“布達(dá)佩斯條約國(guó)際保藏單位”，成為一個(gè)持有國(guó)際牌照的微生物“銀行”。

“這里主要是收集、保藏、鑒定、交換和供應(yīng)各類生物材料?！币恍┭邪l(fā)中分離出的，暫時(shí)不知道有什么功能，就作為資源儲(chǔ)備儲(chǔ)存；而研究課題需要收集、篩選的菌類，結(jié)題后也可存放備份。幾十年來(lái)，保藏中心共提供了幾十萬(wàn)株各類微生物，在我國(guó)生命科學(xué)和生物技術(shù)研發(fā)中貢獻(xiàn)。

低溫生物的濾紙保藏法

(1)將濾紙剪成0.5×1.2cm的小條，裝入0.6×8cm的安瓿管中，每管1-2張，塞以棉塞，1.05kg/cm2>，121.3℃滅菌30分鐘。

(2)將需要保存的，在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使充分生長(zhǎng)。

(3)取滅菌脫脂牛乳1-2ml滴加在滅菌培養(yǎng)皿或試管內(nèi)，取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內(nèi)混勻，制成濃懸液。

(4)用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內(nèi)，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

(5)將安瓿管放入內(nèi)有二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干。

(6)將棉花塞入管內(nèi)，用火焰按圖Ⅶ-13熔封，保存于低溫下。

(7)需要使用，復(fù)活培養(yǎng)時(shí)，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破碎，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟后，取出濾紙，放入液體培養(yǎng)基內(nèi)，置溫箱中培養(yǎng)。

細(xì)菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14-17年之久。此法較液氮、冷凍干燥法簡(jiǎn)便，不需要特殊設(shè)備。