親和柱——原理介紹

親和柱的功能基于抗原與間可逆的特異性結合反應，使其可從復雜樣品基質中特異性地回收目標化合物。上樣后，柱中以共價鍵形式偶聯(lián)在凝膠上的會與抗原（即目標化合物）特異性結合，雜質不會被結合，大部分隨樣品溶液流出小柱。通過淋洗的方式除去小柱內剩余雜質后，使用其他洗脫液（根據(jù)對應產(chǎn)品說明書選擇）進行洗脫即可得到潔凈的目標化合物溶液，可直接用于后續(xù)檢測。

親和柱親和層析的基本原理

親和層析是一種吸附層析，抗原（或）和相應的（或抗原）發(fā)生特異性結合，而這種結合在一定的條件下又是可逆的。

所以將抗原（或）固相化后，就可以使存在液相中的相應（或抗原）選擇性地結合在固相載體上，借以與液相中的其他蛋白質分開，達到分離提純的目的。此法具有有效、快速、簡便等優(yōu)點。

親和柱——親和層析的原理

通常，在開始親和層析前需要預先進行全細胞提取物的粗制，例如細胞裂解液，生長培養(yǎng)基。

首先將固定相裝入帶有流動相的色譜柱中，其中含有某類特定的生物大分子（從DNA到蛋白質，取決于實驗需求）。等待一段時間使兩相充分混合，隨后將洗滌緩沖液倒入色譜柱中。洗滌緩沖液通過破壞非目標生物分子與固定相的較弱結合來去除非目標生物分子。目標生物分子對固定相具有較高的親和力，因此能夠保持與固定相的結合，而不會被洗滌緩沖液沖走。然后將洗脫緩沖液倒入含有剩余目標生物分子的色譜柱中。洗脫緩沖液比洗滌緩沖液，能夠從更大程度上減弱靶生物分子與固定相之間的相互作用，從而洗脫靶生物分子。洗脫得到的溶液包含洗脫緩沖液和目標分子，稱為洗脫液。

固定相一般是凝膠基質，常見的有瓊脂糖。為了防止目標分子與配體結合過程中的空間干擾或重疊，首先將含有烴鏈的抑制連接到瓊脂糖珠（固體支持物）上。這種具有烴鏈的抑制通常被稱為瓊脂糖珠和靶分子之間的間隔基。

親和柱——親和層析介紹

將具有特殊結構的親和分子制成固相吸附劑放置在層析柱中，當要被分離的蛋白混合液通過層析柱時，與吸附劑具有親和能力的蛋白質就會被吸附而滯留在層析柱中。那些沒有親和力的蛋白質由于不被吸附，直接流出，從而與被分離的蛋白質分開，然后選用適當?shù)南疵撘?，改變結合條件將被結合的蛋白質洗脫下來，這種分離純化蛋白質的方法稱為親和層析。利用共價連接有特異配體的層析介質分離蛋白質混合物中能特異結合配體的目的蛋白或其它分子的層析技術。