ELISA試劑盒的制備方法

包括以下步驟：

1)抗原表位的計算機篩選；

2)抗原的制備；

3)采集；

4)間接ELISA方法的建立；

5)間接ELISA方法的敏感性和特異性驗證；

6)試劑盒的穩(wěn)定性驗證；

7)對屠宰場進行臨床檢測。該方法簡單、快速、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性合格、重復性好。應(yīng)用本發(fā)明制得的試劑盒能有效檢出戊型病毒，適用于大批量發(fā)病樣本的檢測，可用于豬戊肝的快速診斷，并預防、控制豬戊病毒的流行和阻斷戊病毒由豬向人傳播。

ELISA試劑盒——會出現(xiàn)的問題及解決辦法

吸光值均偏高(或線性不夠陡)。

a.原因：室溫太高(>25℃)。

解決辦法： 若無法降低室內(nèi)溫度，請適當縮短步驟4的溫育時間。

b.原因：底物溶液受到污染。

解決辦法： 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍色，請不要再使用。

c.原因：反應(yīng)時間超過太久。

解決辦法：請控制反應(yīng)時間。

d.原因：酶標記物污染了盒內(nèi)其它試劑。

解決辦法：使用過的吸頭應(yīng)立即丟棄，可避免試劑間相互污染，凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應(yīng)立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈，可確保無殘留)

Elisa試劑盒技術(shù)原理

(1). 抗原或的固相化及抗原或的酶標記。

(2). 結(jié)合在固相載體表面a的抗原或仍保持其活性。

(3). 酶標記的抗原或既保留其活性，又保留酶的活性。

(4). 受檢標本與固相載體表面的抗原或起反應(yīng)。再加入酶標記的抗原或，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。

(5). 此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。

(6). 加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度（pg-ng/ml水平），并且重復性好。以反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、的特異性反應(yīng)與酶對底物的有效催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗技術(shù)。