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將濾膜轉(zhuǎn)到200ml預(yù)洗液的玻璃皿中。濾膜何疊在一起,放于溶液中。用保鮮膜蓋住玻璃皿,放到位于培養(yǎng)箱內(nèi)的旋轉(zhuǎn)平臺(tái)上。于50℃處理30分鐘。在這一步及以后的所有步驟中,應(yīng)緩緩搖動(dòng)濾膜,防止它們粘在一起。
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;亦可經(jīng)15磅高壓滅菌20min處理,可將載玻片上的核酸酶消除。公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開(kāi)展各類(lèi)動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。
,雜交后再通過(guò)細(xì)胞化學(xué)過(guò)程連接上熒光染料[1,2].FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上,再用與熒光素分子偶聯(lián)的單與探針?lè)肿犹禺愋越Y(jié)合來(lái)檢測(cè)DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對(duì)定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長(zhǎng)期保存、能同時(shí)顯示多種顏色等優(yōu)點(diǎn),不但能顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時(shí)在熒光原位雜交基礎(chǔ)上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術(shù)和染色質(zhì)纖維熒光原位雜交技術(shù).
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;對(duì)分散在若干個(gè)瓊脂平板上的少數(shù)菌落(100-200)進(jìn)行篩選時(shí),可采用該方法。公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開(kāi)展各類(lèi)動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。切片及細(xì)胞標(biāo)本的制備
載玻片的處理 因?yàn)樵浑s交一般在載玻片上進(jìn)行,所以載玻片必須保持清潔且不能有任何核酸酶的污染。一般載玻片可先經(jīng)洗衣粉浸泡過(guò)夜,用流水沖洗、酸中浸泡4~8h,再用流水沖洗,雙蒸水洗2~3次。在160℃烤箱中烘烤2~4h。RNA原位核酸雜交又稱(chēng)RNA原位雜交組織化學(xué)或RNA原位雜交。亦可經(jīng)15磅高壓滅菌20min處理,可將載玻片上的核酸酶消除。
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;它主要是利用物種之間DNA同源性的差異,用另一物種的基因組DNA以適當(dāng)?shù)臐舛茸鞣庾瑁诎腥旧w上進(jìn)行原位雜交。公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開(kāi)展各類(lèi)動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。
陰性對(duì)照用已知不存在相應(yīng)靶序列的組織標(biāo)本雜交,結(jié)果應(yīng)為陰性。陰性對(duì)照可排除在雜交過(guò)程中由于非特異性雜交反應(yīng)等因素造成的假陽(yáng)性結(jié)果。
陽(yáng)性對(duì)照用已知含靶序列的組織切片與待檢標(biāo)本同樣處理,結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性,稱(chēng)陽(yáng)性對(duì)照。通過(guò)陽(yáng)性對(duì)照可證明雜交過(guò)程中各個(gè)步驟以及所使用的試劑都合乎標(biāo)準(zhǔn),實(shí)驗(yàn)方法可靠。尤其當(dāng)待檢標(biāo)本為陰性時(shí),陽(yáng)性對(duì)照片呈陽(yáng)性反應(yīng)可排除待檢標(biāo)本假陰性的可能。1)將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復(fù)使用十次左右)。故若預(yù)期雜交結(jié)果為陰性時(shí),就必須設(shè)陽(yáng)性對(duì)照,當(dāng)陽(yáng)性對(duì)照亦不顯色,就證明雜交過(guò)程的某一步驟或所用試劑問(wèn)題。