武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;畢赤酵母(PichiapastorisGS115)是營(yíng)養(yǎng)型酵母的一種,目前已經(jīng)發(fā)展成為表達(dá)外源蛋白的理想宿主。公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開(kāi)展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。
馬鈴薯(Solanum tuberosum L.)是世界上糧菜兼用型作物,在人們的日常生活和國(guó)民經(jīng)濟(jì)中起著舉足輕重的作用。馬鈴薯淀粉由于其優(yōu)良的加工性能,應(yīng)用范圍廣泛。在西部大開(kāi)發(fā)的歷史機(jī)遇下,馬鈴薯生產(chǎn)和加工將成為西部農(nóng)村經(jīng)濟(jì)的支柱產(chǎn)業(yè),但適合加工用的優(yōu)良品種少,尤其是淀粉含量高、低還原糖和抗低溫糖化的品種資源匱乏, 嚴(yán)重的限制了馬鈴薯加工業(yè)的發(fā)展。為適應(yīng)馬鈴薯加工業(yè)的迅猛發(fā)展,選育適合加工的品種迫在眉睫。泛素-蛋白酶體通路在植物防衛(wèi)反應(yīng)(包括反應(yīng))中發(fā)揮重要作用,泛素連接酶(ubiquitinligase,E3)則是參與這一過(guò)程的重要組分。但是馬鈴薯是同源四倍體,遺傳分離復(fù)雜,加之高淀粉、低還原糖和低溫下不糖化的育種材料有限,故運(yùn)用常規(guī)育種方法培育淀粉含量高、低還原糖和抗低溫糖化的優(yōu)良品種難度極大。基因工程技術(shù)則可以打破物種間的界限,使得外源基因在受體植株的特定時(shí)空表達(dá),近年來(lái)隨著人們對(duì)淀粉生物合成途徑及其相關(guān)酶的進(jìn)一步深入研究及分子生物技術(shù)的日趨成熟,使得運(yùn)用基因工程技術(shù)調(diào)控淀粉低溫糖化代謝過(guò)程中相關(guān)酶的活性從而提高馬鈴薯塊莖淀粉含量成為可能。
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;:研究MAGI3對(duì)細(xì)胞黏附連接關(guān)鍵蛋白E-cadherin翻譯后修飾及其對(duì)β-catenin在細(xì)胞內(nèi)分布的影響,為探討MAGI3通過(guò)調(diào)控細(xì)胞黏附連接影響侵襲、轉(zhuǎn)移的可能機(jī)制提供線索。公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開(kāi)展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。
洋蔥(Allium cepa L.)屬百合科蔥屬,是世界主栽蔬菜之一,也是我國(guó)主要的出口蔬菜之一。FT(FLOWERING LOCUS T)基因是開(kāi)花植物光周期反應(yīng)過(guò)程中調(diào)控植物成花的關(guān)鍵基因,也是重要的開(kāi)花整合因子。實(shí)驗(yàn)室在前期工作中已經(jīng)成功了洋蔥的開(kāi)花素類似基因Ac FT1及Ac LFT,為確定其功能,本試驗(yàn)分別構(gòu)建了Ac FT1及Ac LFT的正義、反義和RNAi干擾的植物表達(dá)載體,通過(guò)凍融法導(dǎo)入到根癌農(nóng)EHA105中,進(jìn)而通過(guò)花序侵染法轉(zhuǎn)入模式植物擬南芥中。通過(guò)熒光定量PCR法測(cè)定Ac FT1及Ac LFT在擬南芥抽薹前葉片中的相對(duì)表達(dá)含量,觀察轉(zhuǎn)化植株的形態(tài)學(xué)指標(biāo),繼而確定Ac FT1及Ac LFT在洋蔥成花中的作用,為實(shí)現(xiàn)洋蔥抽薹開(kāi)花的基因調(diào)控提供參考。本文構(gòu)建了來(lái)自富含ω-7脂肪酸的貓爪藤(Macfadyenaunguis-cati)ACP-Δ9脫氫酶基因(MucACP-Δ9D)的植物組成型表達(dá)載體,農(nóng)介導(dǎo)轉(zhuǎn)化。試驗(yàn)結(jié)果歸納如下:⑴構(gòu)建了Ac FT1的正義植物表達(dá)載體p Z-Ac FT1,反義植物表達(dá)載體p R-AcFT1,RNAi植物表達(dá)載體p RNAi-Ac FT1;構(gòu)建了AcLFT的正義植物表達(dá)載體p Z-AcLFT,反義植物表達(dá)載體p R-Ac LFT,RNAi植物表達(dá)載體p RNAi-Ac LFT.;⑵利用凍融法將重組質(zhì)粒p Z-Ac FT1、p R-Ac FT1、p RNAi-Ac FT1、p Z-Ac LFT、p R-Ac LFT、p RNAi-Ac LFT導(dǎo)入根癌農(nóng)EHA105中,利用花序侵染法對(duì)擬南芥進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;多胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白能夠特異性介導(dǎo)多胺類物質(zhì)跨膜運(yùn)輸,在調(diào)節(jié)多胺濃度、調(diào)控抗性基因表達(dá)、維持mRNA水平、增強(qiáng)植物抗逆性等方面具有重要功能。公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開(kāi)展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。
采用根癌農(nóng)介導(dǎo)的方法,以農(nóng)介導(dǎo)絲狀真菌遺傳轉(zhuǎn)化的載體PCH-sGFP對(duì)尖孢鐮刀菌甘藍(lán)?;蛢蓚€(gè)生理小種進(jìn)行轉(zhuǎn)化,該載體含有報(bào)告基因—綠色熒光蛋白基因(gfp)和篩選基因—潮磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(hph).獲得轉(zhuǎn)化菌株后,經(jīng)檢測(cè)表明:T-DNA目的片段成功整合到枯萎病菌基因組中,并且單孢繼代培養(yǎng)6代后熒光蛋白仍能穩(wěn)定遺傳.對(duì)轉(zhuǎn)化菌株的生長(zhǎng)速度和致病力進(jìn)行分析,結(jié)果表明:菌株和轉(zhuǎn)化菌株在生長(zhǎng)速度和致病力上沒(méi)有顯著差異.因此,轉(zhuǎn)化菌株可用于甘藍(lán)枯萎病菌的組織病理學(xué)研究.
武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;目前,國(guó)內(nèi)外對(duì)Stathmin蛋白的研究集中在脊椎動(dòng)物,而無(wú)脊椎動(dòng)物中有關(guān)Stathmin蛋白的研究則相對(duì)較少。公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開(kāi)展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。
為建立根癌農(nóng)介導(dǎo)的香蕉遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng),本研究以雄性花誘導(dǎo)產(chǎn)生的貢蕉胚性懸浮系為轉(zhuǎn)化受體,從潮篩選濃度和篩選方法兩方面進(jìn)行了優(yōu)化。研究結(jié)果表明,貢蕉懸浮系在M2液體培養(yǎng)下潮的適合篩選濃度為5mg/L。將液體共培養(yǎng)7d后的貢蕉胚性懸浮系轉(zhuǎn)接到M2液體篩選培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),每10d繼代一次。GUS組織染色表明,經(jīng)過(guò)3代抗性篩選的ECS幾乎全為轉(zhuǎn)化細(xì)胞。經(jīng)過(guò)3個(gè)月的胚誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得成熟抗性體細(xì)胞胚,平均抗性體細(xì)胞胚得率為4580個(gè)/mLPCV。ASS基因與GFP的融合蛋白產(chǎn)物在葉片中定位于胞質(zhì),在洋蔥表皮中定位于胞質(zhì)和細(xì)胞核,白木香原生質(zhì)體中定位于胞質(zhì)和質(zhì)體。同時(shí),轉(zhuǎn)化苗的PCR檢測(cè)結(jié)果表明,gus基因已整合到貢蕉基因組中。本研究表明液體篩選系統(tǒng)有利于轉(zhuǎn)化胚性懸浮細(xì)胞的增殖,大大地提高了香蕉轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)化效率。