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原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精0準(zhǔn)確定量定位的過(guò)程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。
原位雜交(in situ hybridization)將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交,稱為原位雜交。
使用DNA或者RNA探針來(lái)檢測(cè)與其互補(bǔ)的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置。
原位雜交;原位雜交(in situ hybridization)將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交,稱為原位雜交!
使用DNA或者RNA探針來(lái)檢測(cè)與其互補(bǔ)的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置。
以菌落原位雜交為例:對(duì)分散在若干個(gè)瓊脂平板上的少數(shù)菌落(100-200)進(jìn)行克8隆篩選時(shí),可采用本方法。將這些菌落歸并到一個(gè)瓊脂主平板以及已置于第二個(gè)瓊脂平板表面的一張硝5酸纖維素濾膜上。經(jīng)培養(yǎng)一段時(shí)間后,對(duì)菌落進(jìn)行原位裂解。主平板應(yīng)貯存于4℃直至得到篩選結(jié)果。
多種探針標(biāo)記檢測(cè)系統(tǒng)
基于地高3辛、生物素和熒光標(biāo)記分子的標(biāo)記和檢測(cè)系統(tǒng)是常見(jiàn)的原位雜交檢測(cè)方法。
熒光標(biāo)記檢測(cè)常為直接探針標(biāo)記方法,如在dUTP/UTP/ddUTP上連接Fluorescein后進(jìn)行核酸標(biāo)記。由于標(biāo)記在核酸上的熒光分子必須經(jīng)受雜交和洗脫過(guò)程中的考驗(yàn),以及熒光分子易于衰減,其檢測(cè)靈敏度受到一定的影響。但對(duì)熒光分子的直接檢測(cè)呈現(xiàn)的背景較低。