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雙分子熒光互補(bǔ)電話 思特進(jìn)

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發(fā)布時(shí)間:2021-10-04 05:17  






武漢思特進(jìn)科技發(fā)展有限公司成立于2007年,是一家以實(shí)驗(yàn)技術(shù)研發(fā)、實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品研發(fā)、日化產(chǎn)品研發(fā)、實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目承接為一體的高新技術(shù)公司;公司實(shí)驗(yàn)中心有分子生物學(xué)平臺(tái)、細(xì)胞平臺(tái)、光鏡平臺(tái)、植物組培平臺(tái)、原核蛋白表達(dá)平臺(tái)、日化產(chǎn)品生產(chǎn)平臺(tái);可以開展各類動(dòng)、植物、細(xì)菌、細(xì)胞等生物實(shí)驗(yàn)。對這些特異條帶進(jìn)行并測序,其中5個(gè)測序成功,另外2個(gè)測序失敗。




柑橘潰瘍病是由地毯草黃單胞柑橘致病變種(Xanthomonas axonopodis pv.citri,Xac)引起的一種病害,可影響大部分的商業(yè)柑橘栽培品種,造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。結(jié)論:紅樹Bet/ProT2基因能通過吸收甜菜堿和/或脯氨酸來降低氧化傷害,顯著提高轉(zhuǎn)基因水稻的耐鹽能力。選育抗病品種是解決該病害問題的根本途徑,其中,利用基因工程將抗病基因?qū)朐耘嗥贩N是解決柑橘病害的一條快速而有效的途徑。WRKY轉(zhuǎn)錄因子和病程相關(guān)蛋白(pathogenesis-related proteins,PRs)在植物抗病信號調(diào)控途徑中起著重要作用。本研究根據(jù)柑橘潰瘍病高感品種紐荷爾臍橙(Citrus sinensis(L.)Osbeck)和高抗品種四季橘(Citrus madurensis)受潰瘍病侵染后的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),篩選了在這兩個(gè)品種中表達(dá)差異顯著的24個(gè)WRKY和4個(gè)PR基因進(jìn)行研究,在此基礎(chǔ)上,詳細(xì)研究了4個(gè)WRKY基因和2個(gè)PR1基因在柑橘潰瘍病抗性中的功能和作用。具體研究結(jié)果如下:1.候選基因的和生物信息學(xué)分析了Cs WRKY22、Cs WRKY50、Cs WRKY72-1、Cs WRKY72-2、和Cs PR1-1、Cs PR1-2的編碼序列,ORF分別為921bp、480bp、1809bp、1767bp、501bp和480bp。用MEGA5.2軟件分析其與其他植物同家族蛋白氨基酸序列的親緣關(guān)系,并構(gòu)建進(jìn)化樹。發(fā)現(xiàn)Cs WRKY22與可可WRKY29,Cs WRKY50與棗WRKY50,Cs WRKY72與可可WRKY72,Cs PR1-1與可可PR-1,Cs PR1-2與龍眼PR-1的親緣關(guān)系較近。


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是常見的、對人類健康危害比較嚴(yán)重的環(huán)境污染物之一,可通過皮膚、呼吸道和消化道等途徑進(jìn)入人體,導(dǎo)致身體組織發(fā)生病變,從而引起多種疾病和的發(fā)生。而基因的表達(dá)調(diào)控是在多級水平上參加的復(fù)雜事件,其中轉(zhuǎn)錄起始是基因表達(dá)的的調(diào)節(jié)環(huán)節(jié),翻譯以及翻譯后加工是基因表達(dá)的基本控制點(diǎn)。因此,毒性研究已經(jīng)成為大家關(guān)注的焦點(diǎn)之一。能抑制細(xì)胞分裂,誘導(dǎo)微核形成,導(dǎo)致部分細(xì)胞,但的毒性作用機(jī)制不是很清楚。酵母具有遺傳背景簡單,生長周期短等優(yōu)點(diǎn),是研究真核生物細(xì)胞學(xué)機(jī)制的模式生物。已有研究證明,可以誘導(dǎo)酵母細(xì)胞凋亡,并且伴隨著胞內(nèi)活性氧(ROS)水平的升高,但是關(guān)于誘導(dǎo)酵母細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制研究尚處在起步階段,尤其是動(dòng)物體內(nèi)相對保守的凋亡抑制基因BCL-2和CED-9在此過程中的作用尚未見報(bào)道。本文以酵母細(xì)胞為主要材料,研究了亞誘導(dǎo)細(xì)胞的作用機(jī)制。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下: 濃度為1-7 mmol/L的亞可抑制酵母細(xì)胞生長,并具有劑量依賴性,其中7 mmol/L亞幾乎完全抑制了細(xì)胞的生長和分裂。亞可誘導(dǎo)酵母細(xì)胞,細(xì)胞率隨處理濃度的升高和作用時(shí)間的延長逐漸升高。利用ROS熒光指示劑DCFH-DA, Ca2 熒光指示劑Fluo-3AM和NO熒光指示劑DAF-FM DA檢測胞內(nèi)ROS、Ca2 和NO水平,發(fā)現(xiàn)亞可誘導(dǎo)酵母胞內(nèi)ROS, Ca2 和NO水平顯著升高。


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洋蔥(Allium cepa L.)屬百合科蔥屬,是世界主栽蔬菜之一,也是我國主要的出口蔬菜之一。根據(jù)已報(bào)道的Δ8-脂肪酸脫氫酶基因設(shè)計(jì)引物,分別從小眼蟲藻基因組DNA和cDNA中擴(kuò)增得到該基因片段,序列分析表明:結(jié)構(gòu)基因長1266bp,編碼421個(gè)氨基酸。FT(FLOWERING LOCUS T)基因是開花植物光周期反應(yīng)過程中調(diào)控植物成花的關(guān)鍵基因,也是重要的開花整合因子。實(shí)驗(yàn)室在前期工作中已經(jīng)成功了洋蔥的開花素類似基因Ac FT1及Ac LFT,為確定其功能,本試驗(yàn)分別構(gòu)建了Ac FT1及Ac LFT的正義、反義和RNAi干擾的植物表達(dá)載體,通過凍融法導(dǎo)入到根癌農(nóng)EHA105中,進(jìn)而通過花序侵染法轉(zhuǎn)入模式植物擬南芥中。通過熒光定量PCR法測定Ac FT1及Ac LFT在擬南芥抽薹前葉片中的相對表達(dá)含量,觀察轉(zhuǎn)化植株的形態(tài)學(xué)指標(biāo),繼而確定Ac FT1及Ac LFT在洋蔥成花中的作用,為實(shí)現(xiàn)洋蔥抽薹開花的基因調(diào)控提供參考。試驗(yàn)結(jié)果歸納如下:⑴構(gòu)建了Ac FT1的正義植物表達(dá)載體p Z-Ac FT1,反義植物表達(dá)載體p R-AcFT1,RNAi植物表達(dá)載體p RNAi-Ac FT1;構(gòu)建了AcLFT的正義植物表達(dá)載體p Z-AcLFT,反義植物表達(dá)載體p R-Ac LFT,RNAi植物表達(dá)載體p RNAi-Ac LFT.;⑵利用凍融法將重組質(zhì)粒p Z-Ac FT1、p R-Ac FT1、p RNAi-Ac FT1、p Z-Ac LFT、p R-Ac LFT、p RNAi-Ac LFT導(dǎo)入根癌農(nóng)EHA105中,利用花序侵染法對擬南芥進(jìn)行轉(zhuǎn)化。


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