多彩色熒光原位雜交技術(shù)多彩色熒光原位雜交(Multicolor fluorescence in situ hybridization，mFISH)是在熒光原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新技術(shù)，它用幾種不同顏色的熒光素單獨(dú)或混合標(biāo)記的探針進(jìn)行原位雜交，能同時(shí)檢測(cè)多個(gè)靶位，各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同，呈現(xiàn)多種色彩，因而被稱(chēng)為多彩色熒光原位雜交。它克服了FISH技術(shù)的局限，能同時(shí)檢測(cè)多個(gè)基因，在檢測(cè)遺傳物質(zhì)的突變和染色體上基因定位等方面得到了廣泛的應(yīng)用(楊明杰等1998)。

原位雜交(In Situ Hybridization)也叫原位雜交組化(in situ hybridization histochemistry, ISHH)，是一種固相分子雜交的方法，bai它是用標(biāo)記的DNA或RNA為探針，在原位檢測(cè)組織或細(xì)胞內(nèi)特定核酸序列的方法。探針的種類(lèi)按所帶標(biāo)記物可分為同位素標(biāo)記探針和非同位素標(biāo)記探針兩大類(lèi)。常用的同位素標(biāo)記物有3H、35S、125I和32P，非同位素標(biāo)記物中目前很常用的有生物素、地高6辛和熒光素三種。探針的種類(lèi)按核酸性質(zhì)不同又可分為DNA探針、cDNA探針、RNA探針和合成寡核苷酸探針。

原位雜交術(shù)可在原位檢測(cè)細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)，有很高的敏感性和特異性，已成為細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。

使用分支DNA信號(hào)擴(kuò)增的RNA FISH

Invitrogen? ViewRNA?和PrimeFlow?檢測(cè)是使用分支DNA信號(hào)擴(kuò)增 (bDNA) 來(lái)檢測(cè)特異性信號(hào)的直接熒光RNA ISH方法。 使用獨(dú)立但兼容的信號(hào)擴(kuò)增系統(tǒng)讓RNA靶標(biāo)的多重復(fù)用成為可能。 熒光RNA原位雜交檢測(cè)分為四個(gè)主要步驟：樣本制備、靶標(biāo)雜交、信號(hào)擴(kuò)增以及檢測(cè)。 該方法可實(shí)現(xiàn)更高的特異性，更低的背景值和更高的信噪比。

根據(jù)不同的雜交實(shí)驗(yàn)要求，應(yīng)選擇不同的核酸探針。在大多數(shù)情況下，可以選擇克0隆的DNA或cDNA雙鏈探針。但是在有些情況下，必須選用其它類(lèi)型的探針如寡核苷酸探針和RNA探針。例如，在檢測(cè)靶序列上的單個(gè)堿基改變時(shí)應(yīng)選用寡核苷酸探針，在檢測(cè)單鏈靶序列時(shí)應(yīng)選用與其互補(bǔ)的DNA單鏈探針（通過(guò)克0隆人M13噬菌體DNA獲得）或RNA探針，寡核苷酸探針也可。長(zhǎng)的雙鏈DNA探針特異性較強(qiáng)，適宜檢測(cè)復(fù)雜的靶核苷酸序列和病原體 ，但不適宜于組織原位雜交，因?yàn)樗灰淄高^(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入胞內(nèi)或核內(nèi)。在這種情況下，寡核苷酸探針和短的PCR標(biāo)記探針（80～150bp）具有較大的優(yōu)越性。