國(guó)TwistDx Inc公司開發(fā)的重組酶聚合酶擴(kuò)增(Recombinase Polymerase Amplification，RPA)--被稱為是可以替代PCR的核酸檢測(cè)技術(shù)，目前全球新的等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)。以此為基礎(chǔ)的TwistAmp? 核酸擴(kuò)增產(chǎn)品，能夠在15分鐘內(nèi)進(jìn)行常溫下的單分子核酸檢測(cè)。該技術(shù)對(duì)硬件設(shè)備的要求很低，特別適合用于體外診斷、獸醫(yī)、食品安全、生物防御和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域。

常規(guī)PCR必須經(jīng)過變性、退火、延伸三個(gè)步驟，而PCR儀本質(zhì)上

恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

應(yīng)用領(lǐng)域:廣泛應(yīng)用于臨床診斷，食品安全檢測(cè)，動(dòng)物疾病檢測(cè)等領(lǐng)域

技術(shù)特點(diǎn):快速，特異，無需專門設(shè)備

類型:取代PCR的恒溫核酸擴(kuò)增技術(shù)，目前有應(yīng)用前景的就是RPA技術(shù)，此外也有一些其他恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，主要包括：

1. 滾環(huán)核酸擴(kuò)增( rolling circle amolification，RCA )

2.環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增( loop-mediated isothermal amplification，LAMP)

2018年，TwistDx推出了一系列全新的液態(tài)重組酶聚合酶擴(kuò)增 (RPA)試劑盒，這些試劑盒非常適合需要不使用熱循環(huán)儀就能在15分鐘內(nèi)完成 DNA/RNA 擴(kuò)增的實(shí)驗(yàn)室以及想要靈活構(gòu)建試驗(yàn)體系的研究人員使用。

TwistAmp??Liquid試劑盒提供經(jīng)甘油穩(wěn)定化處理的液態(tài)RPA試劑，該形態(tài)對(duì)于在實(shí)驗(yàn)室執(zhí)行 PCR 和其他基于酶的反應(yīng)的任何人來說都非常熟悉。這些試劑各自裝于單獨(dú)的試管中，用戶可隨意從中移取任何量的酶混合液來構(gòu)建自己所選的RPA反應(yīng)體積，配制用于多次反應(yīng)的預(yù)混液，或者以各種 RPA 組分比例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)以優(yōu)化試驗(yàn)。

常規(guī)PCR必須經(jīng)過變性、退火、延伸三個(gè)步驟，而PCR儀本質(zhì)上就是一個(gè)控制溫度升降的設(shè)備。RPA反應(yīng)的溫度在37°C - 42°C之間，無需變性，在常溫下即可進(jìn)行。這無疑能大大加快PCR的速度。此外，由于不需要溫控設(shè)備，RPA可以真正實(shí)現(xiàn)便攜式的快速核酸檢測(cè)。

據(jù)介紹，RPA檢測(cè)的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂幔ㄓ绕涫荄NA）模板擴(kuò)增到可以檢出的水平，從單個(gè)模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理，適用于無法提取核酸的實(shí)地檢測(cè)。