反相色譜分離純化后，怎樣除去流動(dòng)相產(chǎn)品中的TFA和乙腈或其他雜質(zhì)？

TFA是反相色譜分離中常用的添加劑?？梢杂脙龈傻霓k法去除，國(guó)外許多文獻(xiàn)是這樣報(bào)道的。還可以試試離子交換、凝膠層析、甚至透析和超濾，其中，離子交換層析效果比較好，還可以起到濃縮樣品的作用。

首先，凍干的辦法應(yīng)該可以幾乎完全地除去TFA和乙腈，藥品實(shí)驗(yàn)前盡量先檢測(cè)一下凍干品中的殘留量，只要不超過允許范圍，這種辦法是很簡(jiǎn)單、有效的。

其次，如果你的藥品的分裝量不大的話(<100ug)，建議你用離子交換層析，盡量裝一個(gè)小一點(diǎn)兒的柱子，讓含鹽洗脫峰的蛋白濃度達(dá)10mg/mL以上，稀釋后完全符合試驗(yàn)要求。如果用分子篩，考慮稀釋，盡量也先過一個(gè)離子交換。此外可以試試疏水層析。如果產(chǎn)品是堿的話，可能會(huì)形成TFA鹽，這樣通過上述方法就無法除去。一般可以用堿水洗，然后將產(chǎn)品萃取出來。或者在里面加入一定量的鹽酸，再干燥后形成鹽酸鹽。

制備色譜之DAC如何次次裝出高柱效

動(dòng)態(tài)軸向壓縮柱（Dynamic Axial Compression Column，DAC）是工業(yè)化制備液相色譜分離的重要組成部分。當(dāng)用戶填裝直徑50mm以上制備柱時(shí)，傳統(tǒng)預(yù)裝柱很難裝出高柱效和對(duì)稱性，另外預(yù)裝柱使用過程柱頭容易塌陷，導(dǎo)致柱效變差，無法滿足長(zhǎng)期持續(xù)純化生產(chǎn)。DAC在運(yùn)行過程中，活塞可以提供持續(xù)壓力，保證很優(yōu)的填裝柱床密度和穩(wěn)定性，從而長(zhǎng)時(shí)間保持很佳分離效果。相比于預(yù)裝柱或彈簧柱，DAC可以輕松填裝和拆卸，實(shí)現(xiàn)不同填料反復(fù)填裝和輕松切換。有人說大柱子不用考慮柱效和對(duì)稱性，只要能分出樣品就行。現(xiàn)實(shí)是色譜就是靠柱效來分離的，柱效越高，分離越好，載量越大，收率和得率越高。

通常制備色譜方法開發(fā)在4.6mm，10mm或20mm的半制備柱，然后放大到DAC50或DAC100, DAC200，DAC300, DAC450, DAC600或DAC800。理論上多大規(guī)模的色譜柱都可以實(shí)現(xiàn)與分析柱或半制備柱同樣的效率，在現(xiàn)實(shí)中，設(shè)計(jì)優(yōu)良的DAC柱效甚至高于預(yù)裝柱。只有柱效和對(duì)稱性類似才能保證了分離方法的線性放大。

制備色譜

制備色譜是以分離出純物質(zhì)為目的的色譜系統(tǒng)，分析色譜是以分析出樣品組分信息為目的的色譜系統(tǒng)，基于他們目的的不同，制備色譜相對(duì)于分析色譜有很多不同特征，不能簡(jiǎn)單等同。

當(dāng)我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室中想得到納克乃至毫克級(jí)的純物質(zhì)時(shí)，稍微改裝下分析型色譜系統(tǒng)就能簡(jiǎn)單輕松的完成，不過，若所需制備的純品量很大，此時(shí)，再用分析型色譜系統(tǒng)分離純化，可以預(yù)見這將是一場(chǎng)“災(zāi)難”。

制備色譜常用的色譜模式有低壓，中壓，高壓三種，以應(yīng)對(duì)不同類型和不同純度要求的樣品的分離，同時(shí)盡可能減少成本。

工業(yè)制備色譜

工業(yè)制備色譜系統(tǒng).電氣柜設(shè)置在機(jī)架內(nèi)部左上端,過墻兩通連接二號(hào)兩通球閥,二號(hào)兩通球閥通過單向閥連連接流量調(diào)節(jié)閥,一號(hào)質(zhì)量流量計(jì)一端連接流量調(diào)節(jié)閥,質(zhì)量流量計(jì)另一端通過混合器連接至三號(hào)三通球閥與數(shù)個(gè)進(jìn)樣泵,進(jìn)樣泵通過二號(hào)三通球閥連接壓力變送器,一號(hào)三通球閥通過管道分別連接至在線過濾器與二號(hào)質(zhì)量流量計(jì),二號(hào)質(zhì)量流量計(jì)則通過壓力變送器與一號(hào)兩通球閥連接至流量計(jì)顯示器,電機(jī)連接進(jìn)樣泵;采用上述技術(shù)方案后,本實(shí)用新型有益效果為:其分離效率和生產(chǎn)能力大大高于傳統(tǒng)的柱層析設(shè)備,并可實(shí)現(xiàn)在線監(jiān)測(cè),保證產(chǎn)品的質(zhì)量.