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低溫生物菌種公司歡迎來電,北京開碧源公司

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發(fā)布時(shí)間:2020-12-10 08:17  







低溫生物菌種的原理

菌種保藏有多種方法,其原理大多大同小異,主要是運(yùn)用一些方式盡量降低生物體內(nèi)的代謝,達(dá)到延長生命,減少變異的目的。通常采用的方法為低溫、缺氧、干燥。

低溫主要對菌種產(chǎn)生兩方面的影響,首先,較低的溫度可以減緩機(jī)體細(xì)胞的酶活,降低新陳代謝,達(dá)到保藏菌種的目的。其次,低溫同時(shí)會導(dǎo)致菌體誘發(fā)菌絲自溶機(jī)制,如果降溫過程失誤,同樣會造成機(jī)體的機(jī)械損傷和溶質(zhì)損傷。

微生物具有容易變異的特性,因此,在保藏過程中,必須使微生物的代謝處于不活躍或相對靜止的狀態(tài),才能在一定的時(shí)間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。

低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素,所以,菌種保藏方法雖多,但都是根據(jù)這三個(gè)因素而設(shè)計(jì)的。



                                                       低溫生物菌種貯存的方式

1.冷凍真空干燥法。將已培養(yǎng)、生長豐富的菌體或孢子懸浮于滅菌的、卵白、脫脂奶制成菌懸液,將懸液以無菌操作分裝于滅菌的玻璃安瓿瓶中,每管約0.3-0.5毫升,然后用耐壓橡皮管與冷凍干燥裝置連接,安瓿瓶放在冷凍槽中于-30℃至-40℃迅速冷凍,并在冷凍狀態(tài)下抽空干燥,并在真空狀態(tài)下熔封安瓿,在-20℃保存,一般可保存十年以上,但成本較高。

     2.液氮超低溫保藏法。首先將要保藏的菌種制成菌懸液備用;其次,準(zhǔn)備安瓿瓶,每瓶加入0.8毫升冷凍保護(hù)劑10%(體積比)甘油蒸餾水溶液,塞棉塞滅菌(1公斤/平方厘米,5分鐘)。無菌檢查后,接入要保藏的菌種,火焰熔封瓶口,檢查是否漏氣,將封好口的安瓿瓶放在凍結(jié)器內(nèi),以每分鐘下降1℃的速度緩慢降溫,使保藏品逐步均勻地凍結(jié),直至-35℃,以后凍結(jié)速度就不需控制,安瓿凍結(jié)后立即放入液氮罐內(nèi),在-150至-196℃保藏,該法只有少數(shù)科研院所使用。




低溫生物菌種的冷凍干燥保藏法

(1)準(zhǔn)備安瓿管用于冷凍干燥菌種保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造,形狀可用長頸球形底的,亦稱淚滴型安瓿管(圖Ⅶ-15),大小要求外徑6-7.5mm,長105mm,球部直徑9-11mm,壁厚0.6-1.2mm。也可用沒有球部的管狀安瓿管。塞好棉塞,1.05kg/cm2>,121.3℃滅菌30分鐘,備用。

(2)準(zhǔn)備菌種,用冷凍干燥法保藏的菌種,其保藏期可達(dá)數(shù)年至十?dāng)?shù)年,為了在許多年后不出差錯(cuò),故所用菌種要特別注意其純度,即不能有雜菌污染,然后在適培養(yǎng)基中用適溫度培養(yǎng),使培養(yǎng)出良好的培養(yǎng)物。細(xì)菌和酵母的菌齡要求超過對數(shù)生長期,若用對數(shù)生長期的菌種進(jìn)行保藏,其存活率反而降低。一般,細(xì)菌要求24-48小時(shí)的培養(yǎng)物;酵母需培養(yǎng)3天;形成孢子的微生物則宜保存孢子;線菌與絲狀真菌則培養(yǎng)7-10天。

(3)制備菌懸液與分裝以細(xì)菌斜面為例,用脫脂牛乳2ml左右加入斜面試管中,制成濃菌液,每支安瓿管分裝0.2ml。

(4)冷凍冷凍干燥器有成套的裝置出售,價(jià)值昂貴,此處介紹的是簡易方法與裝置,可達(dá)到同樣的目的。

將分裝好的安瓿管放低溫冰箱中冷凍,無低溫冰箱可用冷凍劑如干冰(固體CO2>)酒精的液或干冰酮液,溫度可達(dá)-70℃。將安瓿管插入冷凍劑,只需冷凍4-5分鐘,即可使懸液結(jié)冰。




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