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HPLC定性分析的主要方法與技術(shù)。

使用保留值定性方法

在所有定性分析方法中， HPLC使用保留值定性分析的方法是基本的方法，他就是合理地運用色譜的一些基本知識對有機化合物所作的反應(yīng)，從而得出有機化合物應(yīng)具有的性質(zhì)。HPLC中，兩種相同的物質(zhì)在同一色譜中應(yīng)具有相同的保留值，因此， HPLC中的定性分析就能充分地應(yīng)用到這一原理，用相同的色譜對未知物質(zhì)進行簡單的成分和性質(zhì)判斷，同時在同一物質(zhì)組分下色譜上形成的未知峰保留值也是一樣的，這樣就可以初步判定未知有機化合物。HPLC的流動相在此基礎(chǔ)上，適當改變流動相來判斷未知有機化合物的基本性質(zhì)，而在連續(xù)變化的過程中，當發(fā)現(xiàn)兩個保留值峰值相同時，我們可以簡單地判斷為未知有機化合物的性質(zhì)相同。盡管 HPLC的保留值定性分析方法可以區(qū)分同樣的物理性質(zhì)，但不能保證具有相同保留值的兩個有機化合物是同一種物質(zhì)，因此在實際應(yīng)用中， HPLC利用保留值定性分析的方法雖然簡單，而且很具操作性，但適用范圍較窄，不能適應(yīng)更多未知有機化合物的性質(zhì)判定。

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遠古羅馬時期，人們就知道將一滴含有混合色素的溶液滴在一塊布或一片紙上，通過觀察溶液展開所形成的同心圓環(huán)，對染料和色素進行分析。事實上，這種簡單的操作已經(jīng)運用了現(xiàn)代色譜的基本原理。

19世紀中期，德國化學家 Runge對古羅馬人的這一做法進行了重大改進，使其具有很好的重復性和定量能力，使得鹽溶液可以在紙上分離；此外，化學家Goppalsr-oeder也將染料和動植物色素分離在長條形紙上，這些研究標志著紙色譜法的建立，并逐漸發(fā)展成現(xiàn)代色譜技術(shù)。

在1903年的華沙自然科學學會生物學會會議上，俄國植物學家 Tswett提出了利用吸附原理分離植物色素的新方法，這是現(xiàn)代色譜學的開端。俄國植物學家 Tswett在1903年召開的華沙自然科學學會生物學會會議上發(fā)表。把碳酸鈣放入直立的玻璃柱中，從頂端注入植物色素的石i油醚浸取液，再用溶劑沖洗，使溶質(zhì)在柱的不同部位形成色帶，首i次向人們公開展示了用色譜法提純的色素溶液以及色譜圖顯示的彩色環(huán)帶柱管。Tswett把這種方法命名為色譜，填充管稱為固定相，沖洗劑稱為流動相。

SCIEX毛細管電泳儀代理——廣州聯(lián)方實驗器材有限公司可為您提供實驗室和生產(chǎn)所需要的SCIEX耗材

一九四八年，用紙電泳儀來研究氨基酸的分離。

1959年，以人造凝膠為載體，制備了聚酰胺凝膠電泳，使電泳的分辨率大大提高，了現(xiàn)代電泳的新紀元。

在1967年，在3毫米直徑的毛細管中進行自由溶液帶電泳。

一九七四年，采用內(nèi)徑為200~500微米的毛細管進行帶電泳分離。

1981年，采用直徑為75微米直徑石英毛細管，30000伏特高壓理論塔板數(shù)達到40萬級，是現(xiàn)代毛細管電泳發(fā)展的里程碑。此后，對毛細管電泳的研究迅速升溫，許多大科學家也開始參與其中。

1984年，采用表面活性劑為背景電解質(zhì)，開辟了毛細管電泳另一重要分枝毛細管電動色譜。

在1987年，結(jié)合傳統(tǒng)的等電聚焦電泳和凝膠電泳方法，實現(xiàn)了毛細管等電聚焦電泳和凝膠電泳。

從1988年開始，從蛋白質(zhì)、多肽、寡核苷酸等方面提取分離出50μ mol蛋白。

毛細管電泳的研究在20世紀80年代后期十分活躍，90年代以來在技術(shù)和應(yīng)用上取得了長足的發(fā)展。