固相萃取柱的使用

簡單的固相萃取可以通過手工方式完成，即在固相萃取柱上端連接一個注射物，通過對注射的擠壓將萃取柱內(nèi)的液體排擠出萃取柱。另外，也可以使用正壓或負壓固相萃取裝置對批量樣品進行固相萃取操作。隨著科技的發(fā)展和樣品數(shù)量的增多，越來越多的分析實驗室開始使用自動固相萃取儀，特別是多通道固相萃取儀對批量樣品進行處理。

固相萃取柱該用什么溶劑進行活化、淋洗和洗脫?

對于這個問題，簡而言之，就是無法統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，必須根據(jù)樣品的性質(zhì)、溶劑背景等情況來進行選擇。

一般來說，標(biāo)準(zhǔn)回答是:固相萃取柱該用什么溶劑進行活化、淋洗和洗脫，這沒有統(tǒng)一的規(guī)定，請根據(jù)您分析所依據(jù)的國標(biāo)、藥典或者已經(jīng)驗證的方法來。

1、活化:固相萃取柱活化的目的有兩個，一個目的是為了浸潤填料、以便樣品溶液能流過固相萃取柱；另一個目的是為了清洗固相萃取柱上面的干擾雜質(zhì)以及溶劑殘留。

2、上樣:讓樣品溶液流過固相萃取柱，讓填料吸附目標(biāo)物質(zhì)。一般流速不能太快，否則吸附不完全，會導(dǎo)致回收率低下。

3、淋洗:需要選擇合適溶劑，既不會把吸附在固相萃取柱填料上面的目標(biāo)產(chǎn)物洗掉，又能清洗掉一些干擾雜質(zhì)，這個的選擇也是根據(jù)既有方法來的，沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。

4、洗脫:選擇合適的溶劑來把吸附在固相萃取柱填料上的目標(biāo)物洗脫掉(大多數(shù)時候需要用試管來收集)，這個溶劑也是根據(jù)具體實驗方法來定的，無法統(tǒng)一規(guī)定。

固相萃取柱的尺寸選擇

理想的固相萃取柱類型應(yīng)該是內(nèi)徑和長度均較大。柱長加大，相應(yīng)的塔板數(shù)則高，柱內(nèi)徑較大，進樣后樣品的原點則小(反映在柱子上就是樣品層較薄)，分離度變大。缺點是采用內(nèi)徑較大的萃取柱需較多的硅膠和溶劑，增加實驗成本?，F(xiàn)在常用萃取柱直徑與長度比一般在1∶5～1∶10，固定相硅膠量是樣品量的30～40倍。萃取柱較短內(nèi)徑較小，相應(yīng)的塔板數(shù)則低，進樣后樣品的原點則大(反映在柱子上就是樣品層較厚，樣品層在固相萃取柱內(nèi)小于0.5cm，各組分較容易完全分離)，分離度變小。

如果所需組分和雜質(zhì)分離度較大(所需組分分離度R>1)，使用硅膠較少、內(nèi)徑較小的萃取柱(例如200毫克的樣品，用2cm×20cm的柱子);如果所需組和雜質(zhì)分離度較小(所需組分分離度R<1)，可以加大萃取柱內(nèi)徑，也可使用極性較小的淋洗劑等。

固相萃取柱操作問題

1、裝柱柱子下的活塞避免使用潤滑劑，以免被淋洗劑帶到產(chǎn)品中。干法和濕法裝柱區(qū)別較小，只要能把柱子裝實即可。裝柱前應(yīng)仔細觀察固相萃取柱是否開裂，避免影響分離效果，裝柱應(yīng)該要適度緊密（太緊密淋洗劑流速太慢，太疏松淋洗劑流速過快）、均勻（避免樣品從一側(cè)斜著流出），避免過柱時出現(xiàn)大量的氣泡。

2、加樣用少量的溶劑溶樣品加樣，打開活塞，待溶劑層下降至石英砂面時，再加少量的低極性溶劑，然后再打開活塞，如此三次，一般石英變成白色。加入淋洗劑后不可立即加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有分開2cm～4cm，再加壓，這樣可以避免溶劑夾帶樣品快速下行。

3、樣品的收集用硅膠作固定相過柱子的原理是一個吸附與解吸的平衡過程。如果樣品與硅膠的吸附較強，樣品解析較慢。這樣就會出現(xiàn)后面的點先出，而前面的點后出的現(xiàn)象，這時可以采用氧化鋁作固定相。另外，收集的試管大小要以樣品量而定，特別是小量樣品，如果用大試管，可能一根就收到了多個樣品，如果都用小試管，缺點是工作量太大。

4、處理萃取柱分離后，由于使用了大量的溶劑，其中的雜質(zhì)也會積累到所需組分中，必要時進行重結(jié)晶。另外，過柱時有時會出現(xiàn)氣泡，這可能存在兩種原因：一是這與使用的溶劑類型有關(guān)，如果是易揮發(fā)的溶劑，在室溫稍高的情況下，很容易出現(xiàn)這種現(xiàn)象。因此，在室溫高的時候，應(yīng)該選擇沸點較高，揮發(fā)性相對小的溶劑。使用混合溶劑時，使用的兩種溶劑的沸點相似。二是在裝柱之前，柱內(nèi)可能存有少量空氣，必須用加壓的方式將空氣排干，這樣就可避免柱中存有空氣。