大腸菌群檢驗方法

國家標準采用三步法，即：乳糖發(fā)酵試驗、分離培養(yǎng)和證實試驗。　　乳糖發(fā)酵試驗：樣品稀釋后，選擇三個稀釋度，每個稀釋度接種三管乳糖膽鹽發(fā)酵管。36±1℃培養(yǎng)48±2h，觀察是否產(chǎn)氣。

　　分離培養(yǎng)：將產(chǎn)氣發(fā)酵管培養(yǎng)物轉(zhuǎn)種于伊紅美藍瓊脂平板上，36±1℃培養(yǎng)18-24h，觀察菌落形態(tài)。

　　證實試驗：挑取平板上的ke疑菌落，進行革蘭氏染色觀察。同時接種乳糖發(fā)酵管36±1℃培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。

　　報告：根據(jù)證實為大腸桿菌陽性的管數(shù)，查MPN表，報告每100ml（g）大腸菌群的MPN值。

常見的水中糞大腸菌群檢測方法如下：

1、多管發(fā)酵法

通過將污染水樣接種入多根試管中進行恒溫培養(yǎng)，利用大腸菌群繁殖時使乳糖發(fā)酵，并能使乳糖蛋白胨培養(yǎng)液變黃，同時產(chǎn)生氣泡的特有現(xiàn)象，根據(jù)不同接種量的發(fā)酵管所表現(xiàn)陽性結(jié)果的數(shù)目，從MPN表中查的相應(yīng)的MPN指數(shù)，計算每升水中糞大腸菌群的zui近似值。

2、濾膜法

將水樣注入已滅菌的放有孔徑為0.45μm濾膜的濾器中，經(jīng)過抽濾，將細菌截留在膜上，然后將濾膜貼于M-FC培養(yǎng)基上，經(jīng)44.5℃溫度下進行培養(yǎng)，計數(shù)培養(yǎng)基上呈藍色或藍綠色的菌落，計算出每升水的糞大腸菌數(shù)。

定量封口機廠家介紹酶底物法檢測使用方法。

配件以及技術(shù)方案：

針對酶底物法檢測的原理采購相應(yīng)的設(shè)備。用途如下：

程控定量封口機：用于定量檢測盤的封口。

酶底物檢測試劑：用于選擇性檢測水中的目標細菌。

51或97定量檢測盤：用于判斷目標微生物數(shù)量。

100毫升定量瓶/取樣瓶：專業(yè)的為水樣與試劑提供溶解環(huán)境。

紫外手持式紫外分析儀帶暗室：測定大腸埃希氏菌時用于在暗室中觀察熒光。

操作方法：

一步：將水樣加入100ml取樣瓶中，加入酶底物法檢測試劑，擰緊蓋子搖勻至完全溶解。

第二步：將樣品加到定量檢測盤中。

第三步：使用程控定量封口機對定量檢測盤進行樣品分配及封口。

第四步：糞大腸菌群的測定則將培養(yǎng)箱設(shè)定為44.5℃，培養(yǎng)24h。

第五步：對照比色盤數(shù)陽性（顯黃色，或熒光）格子數(shù)，按照使用的檢測盤類型，分別查51孔或者97孔MPN表得出100毫升中大腸菌群的菌群數(shù)。對照MPN表出數(shù)據(jù)。

第六步：根據(jù)稀釋倍數(shù)結(jié)果按公式計算結(jié)果。

大腸菌群（個/L）=MPN值×稀釋倍數(shù)×1000mL/100mL。