廣州碩譜生物科技有限公司農(nóng)殘級(jí)弗羅里硅土SPE柱選擇

固相萃取操作中常見的問題

回收率低在一次完整的SPE操作中，目標(biāo)化合物可能會(huì)存在于樣品溶液流出液、淋洗液、洗脫液或吸附劑中，當(dāng)“目標(biāo)物沒有回收或回收率低” 現(xiàn)象發(fā)生時(shí)，可向樣品溶液加入標(biāo)液，然后進(jìn)行完整的SPE操作并將樣品流出液、淋洗液和洗脫液分別收集并分析。

首先確定目標(biāo)化合物存在于哪一部分，進(jìn)而確定問題來自下列哪一環(huán)節(jié)：目標(biāo)化合物在吸附劑上保留不足；目標(biāo)化合物未被完全洗脫；其他環(huán)節(jié)。

由于許多化合物同時(shí)具有多種官能團(tuán)，在選擇固相萃取機(jī)理時(shí)，應(yīng)該根據(jù)目標(biāo)化合物及干擾物的性質(zhì)來考慮采用哪種萃取機(jī)理較為有利。如：2-萘胺是一個(gè)弱堿性化合物（pKa=4.16），在一定的pH條件下還可以呈陽離子狀態(tài)，同時(shí)該化合物具有疏水的非極性官能團(tuán)及親水的極性官能團(tuán)。C18柱的主要官能團(tuán)是十八烷基(octade-cyl),其主要作用力是非極性，第二作用力是極性、陽離子交換。這時(shí)，就應(yīng)該根據(jù)樣品基質(zhì)的具體情況來選擇有利于將目標(biāo)化合物與干擾物分離的萃取機(jī)理。如果樣品基質(zhì)中同時(shí)含有大量的非極性干擾雜質(zhì)，就應(yīng)該避免采用非極性的萃取機(jī)理，而將樣品的pH調(diào)節(jié)到低于其pKa兩個(gè)pH單位，即pH=2.16，并采用陽離子交換機(jī)理。反之，如果樣品中同時(shí)含有大量的陽離子干擾雜質(zhì)，則應(yīng)該調(diào)節(jié)樣品的pH至6.16（高于pKa兩個(gè)單位），采用非極性萃取機(jī)理較為有利。

常見反相鍵合硅膠吸附劑的類型

C2柱

C2柱的官能團(tuán)是乙1基( ethyl)。其主要作用力是非極性、極性，第二作用力是陽離子交換。SPE小柱填料充填壓實(shí)后，形成柱床，當(dāng)溶劑流過小柱時(shí)，速度過快會(huì)產(chǎn)生兩個(gè)問題：一是對(duì)粘結(jié)相填料而言，由于流速過快，使其不能充分浸潤(rùn)舒展，從而使其保持活性降低。因?yàn)镃2的碳鏈?zhǔn)侄?，使得硅膠上的硅羥基(Si-OH)較為暴露在吸附劑表面，從而導(dǎo)致C2具有相當(dāng)顯著的極性特點(diǎn)。在實(shí)際應(yīng)用中，如果目標(biāo)物在C8或C18上吸附作用太強(qiáng)，可用C2來取代。C2的極性作用力比CN的略強(qiáng)。

什么是SPE柱SPE柱是在分析前處理中，用于凈化樣品的一種色譜耗材，由于樣品處理液中經(jīng)常會(huì)有大量的雜質(zhì)（樣品基質(zhì)），因此對(duì)分析結(jié)果可能會(huì)造成較大的影響，因此針對(duì)待測(cè)化合物的特性，選擇適當(dāng)?shù)腟PE柱能有效凈化樣品中的雜質(zhì)。

SPE柱的類型

SPE柱的凈化原理是根據(jù)待測(cè)化合物和雜質(zhì)在柱中填料的保留能力差異，起到分離的作用，這也是色譜的重要原理之一。

通常，根據(jù)待測(cè)化合物和填料之間作用力的不同，SPE柱的填料大致分為幾個(gè)類型，離子交換、HLB（脂性二乙烯苯和親水性N-乙烯基吡咯烷酮）、C18、硅膠、弗羅里硅土、中性氧化鋁等，而作用力大致包括離子鍵、氫鍵和范德華力。廣州碩譜生物科技有限公司農(nóng)殘級(jí)弗羅里硅土SPE柱選擇SPE小柱的應(yīng)用提示1、根據(jù)分析目標(biāo)物的理化性質(zhì)選擇合適的SPE柱。根據(jù)不同的作用力，SPE可選擇吸附待測(cè)化合物或者雜質(zhì)。

實(shí)際的應(yīng)用

可以說， SPE柱的原理和應(yīng)用相當(dāng)廣泛，今天小編就以乳制品中三聚1氰胺的測(cè)定為例，做了一個(gè)小小的實(shí)驗(yàn)，參考 GB/T 22388-2008原乳及乳制品中三聚1氰胺的測(cè)定方法二[1]。這種次生相互作用對(duì)于提取或保留強(qiáng)極性物或污染物十分有用，但對(duì)分析物的吸附也可能是不可逆轉(zhuǎn)的。該實(shí)驗(yàn)采用了陽離子交換 SPE柱(PCX)，因?yàn)槿?氰胺在化學(xué)結(jié)構(gòu)上有三個(gè)胺基-NH2，因而更容易離子化。

本試驗(yàn)用三聚1氰胺溶液在嬰幼1兒奶粉di一段中加入1.0 mg/kg，經(jīng)處理后在液態(tài)溶液中測(cè)定，多次檢測(cè)結(jié)果為0.8~0.9 mg/kg，經(jīng)過多次洗滌、淋洗后，多次使用，結(jié)果為0.6~0.7 mg/kg。

正相作用機(jī)理

正相模式是指SPE小柱固定相極性大于流動(dòng)相極性的分離模式。主要是利用：

固相萃取材料極性表面與目標(biāo)物極性官能團(tuán)之間的極性相互作用。極性作用力的強(qiáng)度比非極性作用力要大，但比離子作用力小。4、洗脫——用小體積的溶劑將被測(cè)物質(zhì)從吸附劑上洗脫下來并收集。常見的極性官能團(tuán)包括羥基、胺基、巰基等。弱極性的基質(zhì)環(huán)境有利于極性作用力的形成，因?yàn)槿鯓O性溶劑沒有能夠與極性固定相形成氫鍵的官能團(tuán)。因此，在SPE的正相萃取中，樣品基質(zhì)多為弱極性的，如正己烷、二氯甲1烷、菜油等，而目標(biāo)物大多含有極性官能團(tuán)。

固相萃?。⊿PE）技術(shù)做為樣品處理的一種重要的方法廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)、制藥、食品、環(huán)境等領(lǐng)域。

實(shí)驗(yàn)室中常用的固相萃取常用方法：

? 重力

? 價(jià)格便宜，速度慢，完全靠重力沒法保證結(jié)果的一致性

? 真空抽濾

? 常用的方法（目前）

? 不支持高1性能的柱子（微粒經(jīng)填料）

? 不適用粘稠樣本和粘性樣品

? 流速不均一

? 離心

? 不常規(guī)，不適用于體積超過100微升的樣品

? 正壓

? 變得越來越普遍

? 流速方便控制且均一

? 提供更高的壓力

? 更容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化

柱子在什么情況下可以清洗一下篩板呢？原來也討論過這個(gè)問題，我也拆下來清洗過，但我看到柱前段的污染更甚，于是就用刀片刮了刮，然后把清洗好的篩板安裝上去。問題解決了，但使用壽命會(huì)不會(huì)減少呢？

答：柱頭污染了，就取出污染的，再裝一些填料。因?yàn)榧尤肽愎瘟诵┨盍?，那么微觀的塔板數(shù)就少了。假入你刮得不多，僅表面，可能就是一些臟物，所以，問題解決。但是今后還會(huì)有同樣問題，再掛，那么不小心刮，影響柱效。建議還是裝一個(gè)預(yù)柱。