解淀粉芽孢桿菌的生理生化特性、抑菌物質(zhì)及其作為益生菌的應用

解淀粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)為芽孢桿菌屬，是一種與枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)親緣性很高的細菌，其在生長過程中可以產(chǎn)生一系列能夠抑制真菌和細菌活性的代謝物。2007年公布的解淀粉芽孢桿菌FZB42的全基因組測序使得人們對這種具有多種次生代謝物生產(chǎn)能力的芽孢桿菌有了更深層次的認識，促進了解淀粉芽孢桿菌的生物利用。本文旨在就解淀粉芽孢桿菌的生理生化特性、抑菌物質(zhì)及其作為益生菌的應用等方面進行綜述。 1、解淀粉芽孢桿菌的生理生化特性 解淀粉芽孢桿菌可產(chǎn)生多種α-淀粉酶及蛋白酶，與枯草芽孢桿菌在形態(tài)、培養(yǎng)特征及生理生化特性方面非常相似；屬兼性，菌落在LB培養(yǎng)基上和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上呈淡黃色不透明菌落，表面粗糙，有隆起，邊緣不規(guī)則，在多種培養(yǎng)基上均不產(chǎn)色素；液體培養(yǎng)靜止時有菌膜形成；革蘭氏染色呈陽性，桿狀，可形成內(nèi)生芽孢，呈橢圓形，兩端鈍圓，芽孢囊不膨大，中生到次端生，有運動性；水解淀粉和明膠，乙酰甲(V-P)試驗陰性，還原試驗陰性，苯丙氨酸脫氨酶試驗、試驗、紅(MR)試驗、試驗均為陰性[ 1,2,3 ]。通過HP-Chemstationystem工作站采集和處理數(shù)據(jù)，先由譜庫初步鑒定成分，結(jié)合化學成分的保留時間、質(zhì)譜、實際成分和保留指數(shù)等進行定性，采用面積化法進行定量。 研究表明，不同的解淀粉芽孢桿菌菌株對培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)條件要求不同，但是總體來說維持在一定的范圍內(nèi)，在基本培養(yǎng)基中能夠良好的生長，其培養(yǎng)溫度一般為31~37 ℃，培養(yǎng)液pH為中性，180~200 r/min培養(yǎng)時間16~24 h為宜[ 4,5,6 ]。

全基因組脫氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid,DNA)的提

菌株的鑒定：對篩選得到的乳酸菌進行16S rDNA序列分析，確定其種屬。將活化好的菌液，進行菌株的全基因組脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid, DNA)的提取[16]，然后對基因組DNA的16S rDNA區(qū)域進行PCR擴增，上游引物27F序列5′-AGAGTTTGATCCTGGCCTCA-3′，下游引物1492R序列：5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′，擴增片段為1 500 bp。PCR體系50 μL：10×buffer 5 μL；脫氧核糖核苷酸三磷酸(deoxy-ribonucleoside triphosphate, dNTP) 5 μL；周鑫等以羧纖維素鈉作為碳源從羚牛糞樣懸液中分離到2株可分解纖維素的解淀粉芽孢桿菌。上游引物(25 μmol/L)0.5 μL；下游引物(25 μmol/L)0.5 μL；Taq DNA 聚合酶(250 U)0.5 μL；模板DNA 1.5 μL ；ddH2O 37 μL。PCR擴增條件為：95 ℃ 3 min；95 ℃ 10 s；55 ℃ 30 s；72 ℃ 1 min；72 ℃ 5 min，2～4反應步驟進行30個循環(huán)。擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測其純度及濃度，將達到測序要求的擴增產(chǎn)物送至上海華大基因進行測序，將測序結(jié)果在美國國立生物技術信息中心(national center for biotechnology information, NCBI)上BLAST進行比對，并確定其種屬。

解淀粉芽孢桿菌是一種廣泛分布于大自然中的革蘭氏陽性菌

解淀粉芽孢桿菌是一種廣泛分布于大自然中的革蘭氏陽性菌，具有很強應用潛力。解淀粉芽孢桿菌屬于芽孢桿菌屬，由于它可以產(chǎn)生液化淀粉酶分解淀粉而被命名為解淀粉芽孢桿菌。將解淀粉芽孢桿菌施入土壤或水體中，能夠降解自然界中一些有毒物質(zhì)，凈化被污染的土壤和河流湖泊。3、根部病害嚴重，線蟲危害的棚區(qū)可用本品1000-3000毫升兌水后于地表，用鋤頭輕翻后用露達或唑磷、阿維菌素等噴灑地表后用塑料膜扣閉5-7天，開膜前澆半水，開膜晾干后整地種植。解淀粉芽孢桿菌又是典型的植物促生菌，能夠分泌蛋白、、酶或多肽等活性物質(zhì)，促進植物生長，防治植物真菌病害。由于解淀粉芽孢桿菌能夠分泌多種活性物質(zhì)，對果蔬表面的病菌有廣泛的抗性，能夠解決果蔬保鮮和長期儲存問題。