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相對于弱酸性化合物而言，弱堿性化合物在陽離子交換固相萃取過程中99%的分解都是陽離子，這一弱堿性化合物所處的環(huán)境系統(tǒng)的 pH值必須低于其 pKa至少兩個 pH單位。洗脫時，環(huán)境體系的 pH值應高于化合物的 pKa值至少兩個 pH單位，99%的化合物此時為中性狀態(tài)，可通過適當?shù)娜軇年栯x子交換柱中洗脫。

選擇離子交換固相萃取柱的種類：為能有效地洗脫吸附在一起的離子化合物，對于含有強離子官能團的目標化合物，一般選用弱離子交換柱；對于含有弱離子官能團的化合物，一般選用強離子交換柱。該方法可避免目標化合物與吸附劑官能團同時處于離子化狀態(tài)，使目標化合物始終保持在不能洗脫的保留狀態(tài)。

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反相式C18分離柱

C18是十八烷基碳鏈上的反相固定相的統(tǒng)稱。除以普通硅膠為基質外，以C18鏈為基質的高聚物小球、氧化鋁、氧化鋯等反相固定相，均可稱為C18鏈。有很多種類型的C18，常見的C18是硅膠基質，稱為 ODS,C18能夠在純水中工作，被稱為C18-AQ。

C18反相柱的固定相為非極性固定相，流動相極性大于固定相極性，常用的溶劑一般為水和甲1醇、乙1腈、四氫呋1喃、異丙1醇等與水互溶的溶劑，適合分離非極性或弱極性的化合物，其洗脫順序一般為樣品極性從高到低。

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劑時值；

洗滌液通道和柱子，有溫度控制，加熱到30攝氏度容易沖洗；

長期使用緩沖液應注意觀察接頭處是否有析出，如有白鹽析出，用10%硝i酸定期沖洗液路(取出柱子，沖洗30 mL10%硝i酸溶液，再用5倍水沖洗)可避免液路堵塞；

選用緩沖液要使用可靠的試劑，避免不純鹽引起不必要的麻煩；過渡流動相是指有機相和水相的組成與分析流動相相同，但溶液中不含緩沖鹽。

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對由非極性力吸附到反相 SPE柱上的目標物，可用弱極性溶劑洗脫，如氯i仿、環(huán)己i烷、乙i酸乙i酯等。只有當溶劑的洗脫強度足夠大時，才能使目標物與吸附劑之間的范德華力破壞，使目標物從 SPE柱洗脫。即使是極性更強的甲i醇，對許多化合物而言，也有足夠的非極性力量來洗脫它。有時候，單種溶劑無法徹底洗脫疏水性強的目標物，可以考慮使用二氯甲i烷：乙i酸乙i酯(1:1，體積比)。

反相模式下，溶劑體系的極性應以樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的次序遞減，并以遞增程度遞減。要確保所選擇的樣本溶劑不會洗脫目標物，所選擇的淋洗劑應在不洗脫目標物的前提下，zui大限度地洗脫干擾物，所選洗脫劑應能碰巧完全洗脫目標物。

(在使用這些清潔溶劑之前，可與柱子供應商協(xié)商，以確保它們不會對填料造成損害。硅樹脂基質中的柱狀物一般都可以用，但是某些洗滌溶劑的配方可能導致有機聚合物基質的填充物膨脹或收縮，從而影響其色譜特性。)此外，確保上表所用的清潔溶劑與以前使用的溶劑可互溶，丙i醇可作為良好的過渡。每一個溶劑系統(tǒng)至少要沖洗20個液柱體積。因為某些溶劑系統(tǒng)粘度較大，應相應調整沖洗流速，以確保不超過泵的壓力。在用完胍或脲等溶劑清洗過的柱子上，至少要用40~50柱體積的 HPLC級純水進行沖洗。對反相柱來說，不推薦使用十二烷基磺酸鈉(SDS)和 Trition等表面活性劑，因為這些化合物一定會牢固地吸附到硅膠結合相柱上，因此難以去除。使用表面活性劑可以改變填料的表面性能。但是， SeparationGroup的研究表明：多肽合成過程中產生的保護基和清除劑對柱體的污染，可通過向流動相中加入500μ L1% SDS溶液，以1 ml/min的速度清除。以5%~95% EBN/1%(v/v)的三i氟乙i酸梯度洗脫后，在平衡起始條件下，柱體的多肽分離功能得以恢復。

在反相-固相萃取模式中，溶劑體系的極性應按樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序遞減，而溶劑體系的洗脫強度應逐漸增加。要確保所選的樣本溶劑不會洗脫目標化合物，所選的淋洗劑應在不洗脫目標化合物的前提下，zui大限度地洗脫干擾物，所選的洗脫劑應能恰巧完全洗脫目標化合物。在許多固相萃取材料的極性表面和樣品中目標化合物的極性官能團之間會產生極性力。通常使用極性力的吸附劑在色譜中被稱為正相色譜吸附劑。極性力比非極性力更強，但比離子力更弱。常用的極性基團有羥基，胺基，巰基等。