保藏的目的、原理及常用的方法有哪些？

微生物具有容易變異的特性，因此，在保藏過程中，必須使微生物的代謝處于不活躍或相對靜止的狀態(tài)，才能在一定的時間內(nèi)使其不發(fā)生變異而又保持生活能力。

低溫、干燥和隔絕空氣是使微生物代謝能力降低的重要因素，所以，保藏方法雖多，但都是根據(jù)這三個因素而設(shè)計的。

保藏方法大致可分為以下幾種：

1．傳代培養(yǎng)保藏法

又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細菌用），培養(yǎng)后于4—6℃冰箱內(nèi)保存。

2．液體石蠟覆蓋保藏法

是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當延長保藏時間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起存活率，另一方面可阻止氧氣進入，以減弱代謝作用。

3．載體保藏法

是將微生物吸附在適當?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當廣泛。

4．寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、此法相當于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進行保藏。

5．冷凍保藏法

可分低溫冰箱（-20—-30℃，-50—-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6．冷凍干燥保藏法

先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。

                                                  低溫生物保藏有雙重“保險”

作為我國可同時提供一般資源服務(wù)和生物材料保存的保藏中心，保藏中心于1995年被列入“布達佩斯條約國際保藏單位”，成為一個持有國際牌照的微生物“銀行”。

“這里主要是收集、保藏、鑒定、交換和供應(yīng)各類生物材料?！币恍┭邪l(fā)中分離出的，暫時不知道有什么功能，就作為資源儲備儲存；而研究課題需要收集、篩選的菌類，結(jié)題后也可存放備份。幾十年來，保藏中心共提供了幾十萬株各類微生物，在我國生命科學和生物技術(shù)研發(fā)中貢獻。

低溫生物的濾紙保藏法

(1)將濾紙剪成0.5×1.2cm的小條，裝入0.6×8cm的安瓿管中，每管1-2張，塞以棉塞，1.05kg/cm2>，121.3℃滅菌30分鐘。

(2)將需要保存的，在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使充分生長。

(3)取滅菌脫脂牛乳1-2ml滴加在滅菌培養(yǎng)皿或試管內(nèi)，取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內(nèi)混勻，制成濃懸液。

(4)用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內(nèi)，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。

(5)將安瓿管放入內(nèi)有二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干。

(6)將棉花塞入管內(nèi)，用火焰按圖Ⅶ-13熔封，保存于低溫下。

(7)需要使用，復(fù)活培養(yǎng)時，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破碎，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟后，取出濾紙，放入液體培養(yǎng)基內(nèi)，置溫箱中培養(yǎng)。

細菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14-17年之久。此法較液氮、冷凍干燥法簡便，不需要特殊設(shè)備。