傳統(tǒng)結(jié)晶板蛋白質(zhì)晶體板比較

在20℃時(shí)雖然微流控芯片上的結(jié)晶條件數(shù)少于24孔結(jié)晶板(67 vs 94),但主要是嗜熱菌蛋白酶的結(jié)晶條件數(shù)顯著減少,其他4種蛋白在兩種方法上均有相近的結(jié)晶條件數(shù),表明微流控芯片能以接近24孔結(jié)晶板的效率進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選.但是,在4℃時(shí)微流控芯片與24孔結(jié)晶板有60%的結(jié)晶條件不同,20℃時(shí)有90%的結(jié)晶條件不同,這表明目前的這種微流控芯片還不能直接代替?zhèn)鹘y(tǒng)的24孔結(jié)晶板,它可以作為蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選時(shí)的一種補(bǔ)充方式。

蛋白結(jié)晶板發(fā)展

可明顯提高其結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量.隨著該方面成功案例的不斷積累,分子改造技術(shù)越來越凸顯出其在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析中的重要作用,特別是對(duì)一些難以結(jié)晶或提高晶體質(zhì)量的蛋白質(zhì)而言,其應(yīng)用價(jià)值更不可忽視.針對(duì)近年來分子改造技術(shù)在蛋白質(zhì)結(jié)晶中的應(yīng)用進(jìn)行了回顧與總結(jié),并展望了其未來的發(fā)展。

在高密度微孔板技術(shù)和DNA微陣列技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的蛋白質(zhì)芯片技術(shù),能夠在蛋白質(zhì)水平上進(jìn)行基因高通量表達(dá)分析,從而成為蛋白質(zhì)組學(xué)研究的有效方法.蛋白質(zhì)芯片依靠手工,壓印或噴墨的方法將探針蛋白點(diǎn)樣在化學(xué)膜,凝膠,微孔板或玻片上形成陣列,經(jīng)過與樣品的雜交捕獲靶蛋白。

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蛋白結(jié)晶板

為滿足固相時(shí)間分辨熒光分析(TRFIA)研究需要,采用固相載體改進(jìn)技術(shù)研制用于檢測系統(tǒng)的聚微孔板,不僅提高TRFIA系統(tǒng)的靈敏度,而且可以把該技術(shù)應(yīng)用到其他分析技術(shù)、生物芯片技術(shù)、污水處理、發(fā)酵工藝、酶工程和親和層析,具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本文將聚微孔板內(nèi)表面固相功能化,研制一種在聚微孔板內(nèi)表面形成耐受強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、的尼龍-6膜層,并在膜層表面化得到活性基團(tuán)與己二酸二酰肼進(jìn)行“手臂”連接,用雙功能基團(tuán)活化,活化后的膜層與蛋白質(zhì)具有很高的連接性能和穩(wěn)定性。

盡管近些年來在蛋白質(zhì)結(jié)晶的理論、方法和技術(shù)上已取得巨大發(fā)展,獲得衍射良好的蛋白質(zhì)晶體仍然是利用X-射線解析蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的一個(gè)主要瓶頸問題。這里我們發(fā)展了一種新型的蛋白質(zhì)結(jié)晶方法—固液界面方法,即SLIM。該方法主要包括兩個(gè)部分1)預(yù)先加入并干燥蛋白質(zhì)母液;2)進(jìn)行晶體生長的時(shí)候,直接將蛋白質(zhì)溶液加入'干母液'中,從而產(chǎn)生一個(gè)固體(干母液)和液體(蛋白質(zhì)溶液)的界面。該方法不僅操作簡單、快速,而且降低了對(duì)蛋白質(zhì)溶液濃度的要求。